实验五蛋白质的颜色反应和沉淀但反应课件
思考题 请说出在上述蛋白质沉淀反应中,哪些为可逆沉淀,哪些为不可逆沉淀? * 实验五 蛋白质的颜色反应及沉淀反应 蛋白质颜色反应原理 蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用,可产生特定的颜色反应。不同蛋白质所含氨基酸不完全相同,颜色反应亦可不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应, 一些非蛋白物质亦可产生相同的颜色反应, 因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物是否是蛋白质。颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。 常见的蛋白质颜色反应 米伦氏反应 双缩脲反应 黄色反应 茚三酮反应 乙醛酸反应 (一)米伦氏(Millon)反应 原理:米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞和亚硝酸汞之混合物,能与苯酚、双酚及某些羟苯衍生物产生颜色反应。这些反应最初产生的有色物质可能为羟苯之亚硝基衍生物,经变位作用变成颜色更深的邻醌肟,最终形成红色稳定产物。组成蛋白质的氨基酸中只有酪氨酸为羟苯衍生物,因此该反应为酪氨酸的显色反应(酚羟基反应)。 注意事项:加热时容易产生暴沸,要注意安全,应温和加热。 (二)双缩脲反应 原理:将尿素加热,两分子尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中,能与硫酸铜结合成红紫色的络合物,此反应为双缩脲反应。蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似,故能呈此反应。一般肽键越多颜色越深,而且受蛋白质特异性影响小 注意事项:硫
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