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可乐中咖啡因的高效液相色谱分析.PPTVIP

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可乐中咖啡因的 高效液相色谱法测定 实验化学四 (综合化学实验) 色谱法简介 混合物随流动相流经色谱柱时,由于个不同组分与固定相的相互作用强弱不同,从而使各组分按先后不同的顺序依次从固定相中流出。 这种利用个组分在两相中具有不同分配系数或吸附系数,使混合物中各组分分离的技术称为色谱法。 作用:分析 分离 流动相:携带样品流过固定相的流动体 固定相:固定不动的一相 按流动相的物态分: 气相色谱 液相色谱 高效液相色谱:在技术上采用了高压泵,高效固定相和高灵敏度检测器,实现了分析速度快,分离效率高和操作自动化。 高效液相色谱的分类: 液—液分配色谱法载体 全多孔型 表面多孔型 化学键合固定相:用化学反应的方法把有机分子结合到载体表面。(如实验所用的C18即十八烷基键合硅胶) 反相色谱优点: 能和水兼容 高效,稳定 适用于大部分物质,应用非常广泛 常被用于从极性溶液中或水相中萃取非极性物质 分析方法: 定性:根据保留值或与其相关的制进行判断,以确定各色谱峰代表何组分 定量:检测信号(峰面积、峰高等)大小与组分的量成正比关系 标准曲线法 归一化法 内标法 实验目的 了解液相色谱仪的基本结构和操作; 了解反相液相色谱法的原理、优点和应用; 掌握标准曲线定量方法。 咖啡因又称咖啡碱,化学名称为1,3,7- 三甲基黄嘌呤,分子式为C8H10O2N4,属黄 嘌呤衍生物,是一种可由茶叶或咖啡中提 取而得的生物碱。它能兴奋大脑皮层,使 人精神兴奋。咖啡中含咖啡因的质量分数 约为1.2%~1.8%,茶叶中约含2.0%~ 4.7 %,可乐饮料、APC药品等中均含咖啡因。 主要仪器与试剂: 1. 色谱仪: Pro Star210(Varian) 2. 色谱柱:C18柱, 200 mm×4.6 mm 3. 流动相: 甲醇:水(60:40), 流速: 1.0 mL/min 4. 检测器: 紫外检测器 UV345 检测波长:275nm 实验步骤: 1. 配制系列标准溶液:40、60、80、100、120μg/ml ;(140μg/ml不用配制) 2. 样品处理:可口可乐、百事可乐干过滤后(弃去前滤液)取25ml用氯仿萃取(加饱和NaCl和NaOH溶液),脱水过滤配成50ml溶液; 3. 制作工作曲线:基线平稳后分别进样标准系列溶液5μL,重复一次,纪录峰面积和保留时间; 4. 样品测定:将配好的样品分别用0.45μm的滤膜过滤后,进样5μL ,根据保留时间确定咖啡因色谱峰并记录其峰面积; 5. 结束试验:清洗所用各仪器,关液相色谱仪及计算机。 数据处理: 1.根据标准系列溶液的色谱图,绘制咖啡因峰面积与其浓度的关系曲线; 2.根据样品中咖啡因色谱峰的面积,由工作曲线得出两种可乐中咖啡因含量。 思考 1、 若标准曲线用咖啡因浓度对峰高作图,能给出准确结果吗?与本实验的标准曲线相比何种优越?为什么? 2、在样品干过滤时,为什么要弃去前过滤液?这样做会不会影响实验结果?为什么? 3、请设计测定茶叶中的咖啡因时样品的处理方法。 开 始 实 验 ! * * 基础化学实验中心 流动相为液体的色谱技术 高 效 液 相 色 谱 液—液分配色谱法 离子交换色谱法 液—固分配色谱法 空间排阻色谱法 流动相极性 固定相极性:正相色谱法 流动相极性 固定相极性:反相色谱法 固定相为依附在载体上的液体 固定相为吸附剂 凝胶渗透色谱法(GPC) 高效液相色谱仪流程示意图 主 要 问 题

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