癸二酸及癸烷110狡酸发酵突变株的研究-遗传.PDF

遗传 HEREDITAS(Beijing) 4(2)} 16--181982 癸二酸及癸烷1:10狡酸发酵突变株的研究 刘祖同 夏玉棉 李冠英 方心芳 〔中国科学院微生物研究所，北京） DCI。及 DC,：是尼龙工程塑料的重要原料，目前 酸百分数 混（合二元酸按癸烷1:10二狡酸分子量计 在机械工业中越来越多的金属零件及轴承保持架用工 数）0 程塑料代替。但这种性能优良的材料因原料缺乏而不 实 验 与 结 果 能得到广泛应用，正烷烃发酵制取的DC,：又因产量 低成本高而限制了投产，特别是目前聚合的全石油发 一（）T2s-14菌株的NaNO,诱变 酵材料尼龙对二狡酸的需求量更大。为满足这类新型 将 T,，一：4菌株接人麦芽汁斜面，289C培养36 材料的需要，本文进行了产 DC,。及 DC高产菌株 小时，取一满环接入盛有 10毫升诱变培养基的容积 的诱变选育。 为250毫升的三角瓶中，培养 36小时，以HIP04调 pH至 4.0-4.5，加入 NaNO,，使其最终浓度为 材 料 和 方 法 0.015M，处理约7分钟，加 Na,HPO,12H.0中和 一（）菌种 T2s-1。是本组诱变热带假丝酵 剩余的亚硝酸以终止反应。吸1毫升处理液接入10 母123。号的突变株”〔；D,。是由T”一：；诱变出的 毫升麦芽汁中，28℃摇床增殖20小时，稀释成不 突变株。 同浓度，涂麦芽汁平板。挑出平板上的小菌落，分别 二（）试剂 CIIIC12,C13，由上海溶剂厂提 划线于含 DC,：指示平板及麦芽汁琼脂平板上。两 供；CIO,Cis，进口分装，纯度 95-99%;C9--CI, 天后挑出DC工，平板上生长微弱而在麦芽汁琼脂平 混合正烷烃，锦西石油化工五厂提供；C,o-C混 板上生长好的菌落，进行产酸筛选。 合正烷烃，北京东方红炼油厂提供；NaNO,,H3PO,, 二（）NaNO：诱变突变株的筛选 Na,HP0,12H,0，均为试剂级；DC,I，本组发酵制 挑选出的一百多株突变株，在菌落形态上可分 取。 为四种：乳色光滑型，淡红色光滑型，乳色皱褶型， 三（）培养基 孚L色千涩皱褶型。 1．种子培养基：麦芽汁琼脂斜面。 将 70多株突变株分别接人麦芽汁琼脂大斜面， 2.诱变及发酵培养基 ％（）：KH,PO,0．8;NaCl 28℃培养48小时，接入含混合正烷烃的发酵培养基 0.1;MgSO,7H,O 0.05；酵母膏 0.05；玉米浆 中，200转 ／分摇床发酵4天，每天调 pH 至8.。，得 。．03;CIO-C混合烷烃或单一烷烃 15%；尿素 到产酸比 U3_,，高的突变株5株 表（ 1)，且都为乳色 。．1015毫升培养基分装于500毫升三角瓶中。 表1NaNO,诱变产二梭酸的突变株 3指·示培养基 （％）：KH,PO,0.2;Na,HP0, 菌 号 耗。.202NNaOH 毫升数 产二梭酸 （％） 12H20 0.07；MgS04.7H,O 0．05；(HN,)2S0, 一 一 一 0.5;酵母膏 0.05；水洗