防腐剂-少油脂食品检定操作.DOC

防腐劑-少油脂食品檢定操作 目的及分析應用範圍: 本法定量防腐劑包括: Benzoic acid苯甲酸(安息香酸)、Sorbic acid 己二稀酸(山梨酸)、 Sodium dehydroacetate去水醋酸、 Para-hydroxyl benzoic acid methylester 對羥苯甲酸甲酯 Para-hydroxyl benzoic acid ethylester 對羥苯甲酸乙酯 Para-hydroxyl benzoic acid propylester 對羥苯甲酸丙酯 等。 摘要: 防腐劑利用醋酸胺溶液(Ammonium acetate)，醋酸(acetic acid)和甲醇(methanol)，經由超音波振盪由食品中抽出。伴隨之抽出物質經由沉澱和過濾加以分離，再利用HPLC和UV-detector加以分離定量別以外標準品之面積，由標準曲線(std curve)計算得之。 化學藥品: 皆為分析級化學藥品，醋酸(acetic acid ，100%)，甲醇(methanol)， 醋酸銨(ammonium acetate，0.01 mol / L) 儀器設備和環境需求 4.1儀器需求 4.1.1 HPLC高效能液相層儀 4.1.2 超音波振盪器 4.2環境需求 4.2.1 儀器要有不斷電系統裝置，使在突然停電的情況下，能有充分的時間正常關機，以保護整個系統。 儀器內要設有空調系統，以維持室內的溫溼度。 收集使用所產生的廢液，此廢液瓶儘可能封緊，以免有機溶劑溢出，污染室內空氣。 配製試劑(試藥) 5.1醋酸銨/醋酸-buffer solution: 1000ml醋酸銨 + 1.2ml醋酸→混合均勻。 5.2萃取溶液: 醋酸銨/醋酸-buffer solution:甲醇(methanol) = 60:40 (v/v) 5.3 HPLC-mobile phase: (1)檸檬酸緩衝溶液:取7 g檸檬酸(Citric acid)與6 g檸檬酸三鈉(Tri-Sodium acid)溶於水定量至100 mL，再稀釋至1000 mL→倒至血清瓶，用NaOH調pH至4.0。 (2)取甲醇:乙腈:檸檬酸緩衝溶液= 1 : 2.5 : 6.5 5.4 stock solution: 100mg std / 100ml (100mg std in 40ml methanol dissolved and to 100 ml with water) 5.5 std solution: 利用Water / Methanol (60/40)混合液進行稀釋。 std1:10mg / L std2:25mg / L std3:50mg / L std4:75mg / L 5.6 Carrez-solution Ⅰ: K4【Fe(CN)6】?3H2O=150 g / Carrez-solution Ⅱ: ZnSO4．7H2O=300 g / L Column: RP-C8，5 ?m，250 mm×4.6 mm (可用C18取代) 6. 注意事項 6.1 安全上的注意事項 6.1.1 請勿在實驗室中吃東西，以免誤食化學藥劑中毒。 6.1.2 所使用之有機溶劑具有毒性，故在操作過程中要避免接觸到皮膚 或吸入，以免中毒。 6.2 技術上的注意事項 6.2.1 使用天平秤量時，需恆溫後進行。 6.2.2 使用有機溶劑時，要在抽氣櫃中進行。 7.步驟: 7.1 sample先以切碎機或均質機細碎成均質完全，液體樣品也要混合均質完全。 7.2萃取步驟: 7.2.1 取5 g樣品精稱至50 mL燒杯中，加入15 mL萃取溶液於超音波振盪器中振盪萃取20 min，懸浮液(包含樣品)倒至100 7.2.2 液體樣品則取5.00~10.00 mL直接以移液吸管加入100 mL定量瓶，再加入75 mL之萃取液。 7.2.3定量瓶於超音波振盪10 min，加入CarrezⅠ1.0 mL，CarrezⅡ 1.0 mL，混合均勻， 靜置後，定容至標線，再混合均勻後過濾(前面的濾液捨棄)。 7.3 HPLC條件: Flow rate: 1 mL / min UV-detector: 235 nm Injection Volumn: 20 μL 先以std solution測試HPLC條件 8.參考文獻: Amtliche Samulung von Untersuchungsverfahren nach §35 LMBG，November 1984, Germany, Untersuc