高速逆流色谱系统-TAUTO上海同田.PPTVIP

* 这张图说明固定相为何可以得到保留 这张图说明物质为何得以分离 * 芫荽 yuansui 中药指纹图系指中药经适当处理后，采用一定的分析手段（光谱和色谱）得到的能够标示该中药特性的共有峰的图谱 中药成分复杂，指纹图谱是中药质量控制的有效方法 2000年8月国家药品监督管理局规定中药注射剂必须建立药材和制剂的指纹图谱标准，美国FDA及欧共体药审委也要求采用指纹图谱技术 色谱法是指纹图谱的首选，传统的色谱指纹图谱方法存在缺陷（比如HPLC法前处理要求严格，会有死吸附或样品的变性，对有些样品不能准确反应其特征） * 分析型HSCCC 为20A 进样量10mg 半制备型HSCCC为300A 进样量300mg 制备型HSCCC 为1000A 进样量1000mg 外标法检测 红霉素A含量88％以上，B和C含量不得大于主峰面积5％ 即合格 * 该方法在低温条件下进行，为易挥发、热不稳定、极性小的化合物提供了一个快速高效稳定的提取分离模式，适合用于挥发油的提取分离。 Qing Chen, Shun Yao, Xuefeng Huang, Jianguang Luo, Junsong Wang, Lingyi Kong * Food Chemistry 2009,117: 504–508 蛇床子中香豆素的HSCCC分离 Ⅰ：花椒毒素 95.0％ 7.6 mg Ⅱ: 异茴芹素 99.6％ 7.6 mg Ⅲ: 佛手苷内酯 99.7％ 9.7 mg Ⅳ: 欧前胡素 100％ 60.5 mg Ⅴ: 蛇床子素 100％ 50.6 mg Ⅵ:未知化合物 98.1％ 10.2 mg 白花前胡甲素 白花前胡丁素 白花前胡素E 白花前胡提取物的HSCCC分离 饮片 醇提，石油醚部位 -4℃下静置，析出白色物 HSCCC分离 野菊花提取物的HSCCC分离 购买野菊花提取物 乙酸乙酯部位 HSCCC分离 蒙花苷 木犀草素 紫薯花青素的HSCCC分离 为旋花科(Convolvulaceae)，番薯(Ipomoea batatas (L.)Lam.)的一年生草本植物。 1 化学成分 花色素类化合物 黄酮及酚类化合物 2 药理作用 抗氧化作用 抗肿瘤作用 降血糖作用 促进改善心血管系统作用 与HPLC比较,其优点是溶剂酸度选择范围大,长时间适用低pH值的溶液对分离效果没有很大影响，且无仪器损耗。 Fan Qiu,Jianguang Luo,Shun Yao,Li Ma, Lingyi Kong* J. Sep. Sci. 2009, 32(12):2146-2151 室温下，200 mg样品溶于4 ml下相,转速880 rpm，流速1.5 mL/min，检测波长520 nm，使用叔丁基甲醚－正丁醇－乙腈－水－三氟乙酸（1:4:1:5:0.01）系统，以上相为固定相，下相为流动相洗脱。 B1 B2 B3 A1 A2 A3 HSCCC图谱 HPLC图谱 不同产地丹参提取物 　 高速逆流色谱法是中药指纹图谱发展的一个新方向 HSCCC工艺放大/分离效果 TBE-20A 分析型HSCCC TBE-300B 半制备型HSCCC TBE-1000A 制备型HSCCC 溶剂体系：石油醚-丙酮-水（3:3:2,v/v）样品：250mg 环孢菌素粗品检测条件：ELSD 环孢菌素 A－98.6%，90.2%(收率) 环孢菌素 C－99.3％，85.0%(收率) 环孢菌素 B－98.7％，88.5%(收率) 环孢菌素 D－98.5％，86.3%(收率) 实例1 环孢菌素粗品 HSCCC在抗生素分离纯化中的应用 溶剂体系：正己烷-乙酸乙酯-甲醇-0.5％氨水 (3:7:5:6,V/V） 检测器：ELSD；进样量：300mg 红霉素A和C含量均在98％以上 实例2 红霉素 HSCCC在抗生素分离纯化中的应用 实例1 藤黄酸异构体的分离 溶剂系统: 正己烷-甲醇-水 (5:4:1) 流动相：下相 流速: 2.0 ml min-1 转速：900 rpm 样品量：50 mg 固定相保留： 50% 分离温度: 25?C A. gambolic acid 97.2% B. epigambolic acid 97.5% 闭合回路系统 Journal of Chromatography A, 2006, Volume 1127, 298-301 HSCCC在异构体分离纯化中的应用　 实例1 利用HSCCC分离标准蛋白质混合物 1 2 3 溶剂体系：PEG1000-磷酸盐体系-水＝14-16-70(%,w/w) 样品：1mg 细胞色素C、 20mg 溶菌酶、5mg 血红蛋白