甜瓜T-DNA插入突变体的构建.pdfVIP

新疆农业科学2016，53(6)：1048—1053 Sciences XinjiangAgricuhural 矗d崩：10．6048／j．issn．1001-4330．2016．06．010 甜瓜T—DNA插入突变体的构建 许荣华，姜陆，宁雪飞，李冠 (新疆大学生命科学与技术学院，乌鲁木齐830046) 摘要：【目的】构建激活标签载体并将其转入甜瓜中，获得甜瓜T—DNA插入突变体，为甜瓜功能基因组学 的研究奠定基础。【方法】用PCR法扩增目的DNA片段，经跏尺I和SacI顺序酶切，将目的片段连接到 Enhancer DNA片段的激活标签载体。以甜瓜品种‘伽师’为材料，利用 pCAMBIA2301载体上，构建含4×35s 农杆菌介导的转化体系转化甜瓜愈伤组织，获得甜瓜T—DNA插人突变体。【结果】获得4株T0代甜瓜转化 幼苗。通过Kan筛选和PCR鉴定甜瓜转化幼苗的DNA中是否含有目的基因，证明其中3株甜瓜转化幼苗为 转基因植株。【结论】获得了突变植株，为甜瓜重要性状基因发掘奠定基础。 关键词：甜瓜；激活标签；T—DNA插入突变体 中图分类号：$652 文献标识码：A 文章编号：1001—4330(2016)06—1048—06 对表型特异突变体进行筛选与分析，明确相关基 0 引言 因的功能为甜瓜优良基因资源的利用奠定了基 【研究意义】甜瓜(CucumismeloL．)是全球的 10大水果之一【lJ，也是葫芦科基因组学研究的模 出来激活标签(Activation tagging)技术，构建了带 式种。新疆作为厚皮甜瓜的次生起源中心之一， 有四个串联花椰菜病毒35S启动子是增强子序列 甜瓜品种类型之多、品质之佳、分布之广、栽培面 的T—DNA载体，转入植物中获得基因过表达的 积之大均居全国首位，有许多品质优良的甜瓜种 突变体。激活标签技术在基因功能组学研究中发 质资源，然而各品种均存在抗病性差、不耐弱光等 挥着重要的作用，激活标签法构建突变体已应用 问题旧J。尽管2012年甜瓜基因组测序的完成获 到拟南芥‘5】，水稻‘61，棉花‘71，油菜‘8I，番茄‘9|，矮 得了大量甜瓜基因组序列的数据日J，但是DNA或牵牛¨驯等植物基因功能研究中，并取得较好成 者蛋白质本身不能为基因的各项生物学功能提供 果。运用激活标签法，已从拟南芥中分离出卸、 足够的信息。研究基因功能最直接的方法之一是 破坏基因的表达并分析由此带来的表型变化。由 基因进行了详细的功能研究。其中以基因编码的 于除了能破坏插入位点基因的表达，插人的片段 蛋白产物是成花激素，是拟南芥诱导开花途径中 还能在分析突变体时用作分子标记，转座子和农 的重要基因；MYB转录因子基因编码的MYB转 杆菌T—DNA插入突变已经成为最广泛应用的方录因子参与植物次级代谢过程，在木质部合成和 法。由于T—DNA插入拷贝数低，平均每一个转分化过程中起重要调控作用；与生长素含量有关 化植株只含1．5个拷贝，而且能在后代稳定遗传， 的yucca基因编码黄素类单加氧酶，YUCCA酶是 农杆菌T—DNA插入突变已经成为研究功能基因色胺途径中形成吲哚一3一乙醛肟的关键酶， 组学应用最广泛的方法大规模构建甜瓜突变体， YUCCA基因过表达导致吲哚一3一乙醛肟过剩， 收稿日期(Received)：2016—02—26 基金项目：国家大学生创