以HPLC法及光谱法测定蜂胶中之类黄酮物质.DOC

以HPLC法及光譜法測定蜂膠中之類黃酮物質 Flavonoids determination of propolis measured by HPLC and spectrophotometry 研究生：張嘉琪 Chia-Chi Chang 指導教授：溫惠美Hwei-Mei Wen 陳景川Jiing-Chuan Chern 【摘要】 本研究採用苗栗區農業改良場所提供之6件原膠，及市售之12件蜂膠產品，進行其一般成分分析，並以以HPLC法及光譜法進行蜂膠中類黃酮物質之定性及定量研究。原膠及市售蜂膠之一般成分分析顯示：原膠中固形物佔約91.09~96.09%，灰分佔約1.39~5.64%，粗脂肪含量佔約38.24~99.87%；市售蜂膠之固形物佔約8.49~96.72%，灰分佔約0.51~33.36%，粗脂肪含量則約為6.98~92.58%。以HPLC分析醣類成分，原膠中含有少量的果糖(12.17~29.68mg%)及葡萄糖(13.62~64.45mg%)，部分市售蜂膠則僅含葡萄糖或蔗糖，多數市售蜂膠甚至完全偵測不到任何糖分。脂肪酸之分析結果發現，原膠或市售蜂膠均僅含微量的脂肪酸，總含量不及2%，顯示高含量的粗脂肪(即乙醚溶出物)非來自油脂成分。原膠以不同濃度之酒精溶液萃取，結果顯示在60%以上之酒精溶液中即具有較佳之萃取效果。各原膠之最大萃取率的差異性很大，範圍在47.5~99.2%，其中巴西或中國產地的蜂膠萃取率較低，而台灣產地的則較高。以HPLC法鑑定蜂膠中類黃酮物質，以15種類黃酮標準品進行測試，尋得之最佳分離條件為：RP-18之分離管柱；動相為水：甲醇：醋酸(80：75：5)；流速為1ml/min；偵測器則為UV 275nm。以上述條件分離Chrysin等15種類黃酮標準品，可得相當良好的分離效果，每一標準品之線性關係(R2)均達0.99以上。將此條件應用在原膠及市售蜂膠之分析上，結果顯示，即使來源相同之原膠，所含的類黃酮種類及含量亦不盡相同，而來自不同產地的蜂膠，則差異性更大。概括而言，原膠中可被鑑定出來的類黃酮物質包括chrysin (8~3917mg%)、apigenin (3~219mg%)、Rutin (22~1257mg%)、Morin (48~339mg%)、Quercetin (8~728mg%)、Myricetin (72~1543mg%)、Kaempferol (2~200mg%)、Galangin (102~1282mg%)、Naringin (147~922mg%)、(±)Naringenin (52~442mg%)、Daidzein (2~60mg%)及Genistein (0.7~3.6mg%)等；而市售蜂膠中可被鑑定的類黃酮物質則包括Chrysin (3~1727mg%)、Apigenin (2~9mg%)、Quercetin (36~439mg%)、Myricetin (31~439%mg)、Kaempferol (1~38mg%)、Galangin (3~489mg%)、Daidzein (0.7~1mg%)及Genistein (2~8mg%)等。總類黃酮含量之測定以光譜法行之，分別採用AlCl3及2,4-Dinitrophenylhydrazine為不同的呈色劑。由測試15種標準品之結果顯示，AlCl3法對flavone及flavonol等物質具較佳之反應性，而2,4-Dinitrophenylhydrazine法則對flavanone較佳。上述二法應用於原膠之酒精萃取液及市售蜂膠之分析上，結果發現兩者的差異性相當大，6件原膠中總類黃酮含量，以AlCl3法測得之範圍在0.03~7.73%之間，而以2,4-Dinitrophenylhydrazine法則在0.19~21.48%之間。另外，12件市售蜂膠中的總類黃酮含量，以AlCl3法測得之含量為0.55~3.95%，而以2,4-Dinitrophenylhydrazine 法測得的含量為0.29~21.30%。由於AlCl3法及2,4-D法分別針對不同的類黃酮物質具有不同的專一性，故本研究建議將兩種方法測得之總類黃酮含量相加之後所得之數值可能更為接近樣品之真正總類黃酮的含量。 關鍵字：蜂膠 類黃酮 【Abstract】 The objectives of this study were to determine the flavonoid contents of 6 raw propolises provided by Miaoli District Agricultural Improvement Station and 12 commercial propolis products, analyzed the nutriti