免疫学检测方法中的干扰因素和对策.ppt

嗜靶抗原自身抗体的干扰－对策 为避免以上情况出现，解决的办法是：测定前标本需用理化方法将免疫复合物解离后再测定。解离液组成： 0.3%Triton X－100 1.5%CHAPS 15%SDS 100μl标本、50 μl解离液混匀，56℃ 30分钟处理。 J Clin Microbiol 1999;37:1802～1808 * PPT课件 干扰因素和对策- 补体 免疫检测系统中捕获抗体在向固相包被中和标记抗体的标记过程中，抗体分子发生变构，其Fc段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q 可以将二者连接起来，从而造成假阳性。一些公司为了增加检测的敏感性，使用链霉亲和素包被固相，将捕获抗体用亲和素标记，此过程也可引起捕获抗体的构象发生改变 ，造成假阳性或假性升高。 * PPT课件 补体的干扰－对策 用终浓度10～40mmol/L EDTA处理标本，灭活补体。 用53℃、10 min或56℃、30 min加热血清使C1q灭活。 * PPT课件 干扰因素和对策- 纤维蛋白 在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下，正常血液采集后1/2开始凝固，2h后完全凝固。临床检验工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时或未完全凝固时即强行离心分离血清，此时血清中仍残留部分纤维蛋白原，在免疫检测过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果，尤其是在使用ELISA检测时。 * PPT课件 干扰因素和对策-纤维蛋白 用Abbott AxSYM分析了3962份血标本中cTnI 水平，其中307份cTnI升高，将这307份标本再离心前后测定cTnI的变化，24份标本在离心后cTnI有45%的降低，这种现象主要出现在cTnI含量在2.0~25μg/L的标本。离心后其中20份样本cTnI值低于正常cutoff值。 Int J Cardiol 2005;101(1):27-31 * PPT课件 为避免上述干扰作用，解决的办法最好是 血液标本采集后必须使其充分凝固再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。 怀疑检测结果存在纤维蛋白干扰的标本，最好将标本4～10℃放置过夜，离心后再检测。 纤维蛋白的干扰－对策 * PPT课件 干扰因素和对策- 溶血或黄疸 各种人为原因引起的标本溶血，导致红细胞的破坏，血红蛋白以及细胞碎片和蛋白质等释放出来。溶血对免疫检测的作用不仅是游离血红蛋白的影响，更多的是细胞碎片和蛋白质等其他溶血产物；血红蛋白具有过氧化物酶活性，在以辣根过氧化物酶为标记的 ELISA测定中，会导致非特异性显色 。溶血因测定方法的不同可导致对免疫学检测的正向或负向干扰，且影响大小也有所差异。 * PPT课件 干扰因素和对策- 溶血或黄疸 一项针对溶血对电化学发光法影响的研究发现，cTnT测定浓度的负偏倚与血清中血红蛋白浓度相关，血红蛋白浓度每增1g/L ，cTnT＞0.1μg/L的可能性下降2.5% 。 Clinical Biochemistry 2004;37(8):398-701 标本中结合胆红素和未结合胆红素任一或两者含量的增高都会对采用免疫学原理的检测系统产生负干扰。 * PPT课件 干扰因素和对策- 交叉反应物质 待检标本中存在类地高辛、类AFP样物质等，是一些与检测的靶抗原有交叉反应的物质。在用多克隆抗体测定抗原时对测定结果影响不大，但在用单克隆抗体测定抗原时 ，如果交叉抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时，会出现假阳性结果。 * PPT课件 干扰因素和对策- 外源性物质 外源性物质常常是由于用于免疫测定的血标本采集、贮存等不当所致。 标本受细菌污染： 因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，被细菌污染的标本在以辣根过氧化物酶为标记的 ELISA测定中，可产生非特异性显色而干扰测定结果。 * PPT课件 标本管中添加物质的影响： 抗凝剂、酶抑制剂（如NaN3可抑制ELISA系统中HRP活性）及分离血清的分离胶等均对免疫检测有一定干扰作用。应用三种检测系统分别测定100对同时采集的肌钙蛋白阳性的血清与肝素抗凝血浆两组标本，在两者测定值差异大于20%的结果中，ACS :Centaur cTnI占11%，Elecsys cTnT占9%，AxSYM cTnI占2%，其他的抗凝剂如EDTA抗凝的血浆肌钙蛋白测定结果也比血清低。 干扰因素和对策- 外源性物质 Clin Chem 2000;46(9):1338