雷帕霉素对高糖诱导的肾系膜细胞自噬抑制氧化-南方医科大学学报.PDF

2012;32(4) 南方医科大学学报（J South Med Univ ） ·467 · 基础研究 雷帕霉素对高糖诱导的肾系膜细胞自噬抑制、氧化损伤和衰老 的影响 李 锦，白雪源，崔少远，傅 博，陈香美 中国人民解放军总医院肾病科/ 肾脏疾病国家重点实验室，北京 100853 摘要：目的探讨雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤（3-MA）对高糖诱导的原代大鼠系膜细胞自噬、氧化损伤及衰老的影响。方法从大 鼠肾分离培养原代肾小球系膜细胞（GMCs），分为正常对照组、高糖组、高糖+雷帕霉素（自噬增强剂）及高糖+3-甲基腺嘌呤（自 噬抑制剂）干预组。在细胞培养24 h、72 h 及10 d 时，Western blotting 观测自噬标志物- 自噬相关基因LC3及泛素结合蛋白p62/ SQSTMI 的表达变化；硫代巴比妥酸法检测细胞脂质损伤产物-丙二醛（MDA）水平，2,4-二硝基苯肼（DNPH）比色法测定细胞蛋 白质损伤产物-羰基含量，通过进行衰老相关β-半乳糖苷酶活性（SA-β-gal）染色及衰老相关异染色质斑块（SAHF）分析检测细胞 的衰老程度。结果与对照组相比，细胞经高糖处