临床生化实验方法的选择和评价.pptVIP

临床生化实验方 法的选择和评价 对于现代化临床化学实验室来说，不但要准确报告实验数据，还要了解实验数据的处理、考核和评价实验方法，正确解释和应用实验数据。 一、实验方法的选择 (一)实验方法和标准品的分级 1、方法的分级 1）决定性方法（definitive method ） 准确度最高，系统误差最小，与真值最接近， 需要精密仪器，高纯度的试剂用途：用于发展及评价参考方法和一级标准品。缺点：技术要求太高，费用昂贵，设备要求高，测定时间长 ２）参考方法（reference method ）： 　已知其准确度和精主工，干扰因素少，系统误差很小。有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。在条件许可的实验室中经常使用。 用途：主要用于鉴定常规方法和试剂盒、鉴定二级标准品，为质控血清定值等 缺点：技术性要求高，费用贵，设备要求较高，测定时间较长 3）常规方法（routine method ） ： 　　性能指标符合临床或其他目的的需要，有足够的灵敏度、准确度和特异性，有适当的分析范围，经济适用。这类方法经有关学术组织认可后可称为推荐方法（recommended method ）。 项目 决定性方法 参考方法 钙 ID-MS 原子吸收分光光度法 氯 电量滴定法、中子活化法 电流滴定法 镁 ID-MS 原子吸收分光光度法 磷 ID-MS 钾 ID-MS、中子活化法 火焰光度法 钠 重量分析法、中子活化法 火焰光度法 白蛋白 免疫化学法 总蛋白 双缩脲法 肌酐 ID-MS、离子交换层析法 离子交换层析法 尿素 ID-MS 尿素酶法 尿酸 ID-MS 尿酸酶法（紫外法） 胆红素 —— 重氮反应法 葡萄糖 ID-MS 己糖激酶法 胆固醇 ID-MS Abell-Kendall法，胆固醇氧化酶法 甘油三酯 ID-MS 酶法 AST（GOT ） —— MDH-NADH法 ALT（GPT） —— LDH-NADH法 转肽酶（r-GT） —— 连续监测产物生成法 肌酸激酶 —— NAD+偶联法 ID-MS：同位素稀释-质谱分析法 2、标准品的分级 　　 标准品是一种物质，它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定，可被用来校正仪器或证实某种实验方法。 1）一级标准品：已确定的稳定而均一的物质，可用于校正决定性方法、评价或校正参考方法，为“二级标准品”定值。一级标准品都有证书，在美国由国家标准局（NBS）发给合格证书，并指明它的性质和有关数据。 2）二级标准品：由参考方法定值有关物质的量，主要用于常规方法的标化或为质控物定值。 3）控制物：用标准品及参考方法定值。用于质控。 （二） 实验方法选择的要求和步骤 实验方法选择的要求 国际临床化学协会（IFCC）提出：常规方法应具有实用性和可靠性两方面的性能指标 。 （1）实用性 ①微量快速能便于急诊，适合成套项目分析。 ②费用低廉，包括劳动力与试剂、设备及一般管理费用等。 ③方法简便。 ④应用安全可靠。 （2）可靠性 一般具有较高的精密度和准确度，以及较大的检测能力。 2、方法选择的步骤 1）广泛查阅资料 根据方法选择的要求对已发表的各种方法进行比较与检验，确定哪些方法有充分的科学根据及真实的使用价值。必须仔细分析各种方法的特点，选择适合于本实验室具体条件的方法，并且要判断所选方法能否满足本室工作的需要。 2）选定侯选方法 经初步选定的方法称为候选方法。候选方法确定后，应该写出该法的原理与参考文献，所用仪器、试剂的来源、牌号、纯度（或配套试剂盒），标本收集要求，详细的操作步骤，标准曲线和结果计算，文献中列出的性能指标，参考值与参考范围，以及其它应注意的事项与安全防护措施等。  3）进行初步试验 为了实用的目的，初试应该包括 ①标准曲线及其重复性； ②质控血清或新鲜标本的重复试验； ③分析待测物浓度不同的标本，与公认的参考方法的测定值作对比； ④要有足够的试验证明仪器与试剂能符合要求。 二、实验方法的评价 （一）评价实验与分析误差类型的关系 1、方法学评价：通过实验途径测定并评价方法的精确度和准确度，在实验中测定的是不精确度和不准确度，强调的是误差，评价实验的过程就是对误差的测定。 2、实验误差 实验误差：测定值与真值之差 1）系统误差（systematic erro