黄酮的提取方案.docVIP

. .. 黄酮提取实验方案 1材料与仪器 1.1 材料 1.2 试剂 芦丁，无水乙醇，氢氧化钠,石油醚，硝酸铝，三氯化铁，三氯化铝，浓氨水，浓盐酸，镁粉，亚硝酸钠（以上均为国产分析纯），实验所用水均为蒸馏水。 1.3 实验仪器 电热恒温水浴锅 电子天平（感量0.0 722型光栅分光光度计 索氏提取器 量筒（100ml,10ml）25ml比色管 移液管 小试管 白瓷板 圆底烧瓶 100m容量瓶 锥形瓶 2 实验原理 2.1 提取原理 2.2 分离方法及原理 3 实验部分 3.1原料的预处理 金星科厥类叶→除杂→水洗→晾干→粉碎 3.2 芦丁—标准溶液的配制 将芦丁在干燥箱里用120℃条件下恒重1.5h,然后精确称取芦丁标准品0.01g用85%的乙醇溶液配制成100.00mL的溶液 3.3 测定波长的选择 精确移取芦丁标准溶液0.50mL,置于25.00mL的比色管中，用质量分数为85%的乙醇稀释到10.00mL处，加人5%的亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀，放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL , 混匀，放置10min,再加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀，放置10min,加入85%的乙醇溶液至刻度，摇匀，10min后在460～560nm处测定吸光度,[4]（以试剂样品做空白）选择最大吸收波长。 3.4 芦丁标准曲线的绘制 精确吸取芦丁标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL于6支25.00mL的比色管中，用质量分数为85%的乙醇稀释到10.00mL处，加人5%的亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀，放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL , 混匀，放置10min,再加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀，放置10min，加入85%的乙醇溶液至刻度，摇匀，10min后于波长500nm处测定吸光度，（以第一瓶为空白溶液）然后以吸光度和芦丁溶液浓度做图，绘制标准曲线。 3.5 黄酮类化合物的特征性实验[5]-[6] 在一定条件下对提取的黄酮类化合物进行特征性实验，具体内容如下： （1） 盐酸—镁粉反应：取1.00mL提取液于试管中加适量镁粉摇匀，再加入浓盐酸数滴（1次加入），观察其泡沫颜色。（2） 三氯化铝反应：取提取液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液，吹干，观察颜色变化。（3） 三氯化铁反应：取几滴提取液于白瓷板上，滴加1%三氯化铁乙醇溶液，观察其颜色。（4） 浓氨水反应：取乙醇提取液点在滤纸上，将滤纸在浓氨水上方熏0.5min，观察其颜色变化。 3.6 单因素实验 2.6.1 较佳 准确称取3g处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别用无水乙醇 、95%、85% 80%、75% 的乙醇60mL对3g金星厥科叶样品在水浴温度为80℃下回流提取3h.提取完毕，用与提取剂的质量分数相同的乙醇反复洗涤圆底烧瓶、滤纸包，将其定容于100:00mL容量瓶中，然后精确吸取0.50mL提取液置于25.00mL的比色管中，用与提取剂质量分数相同的乙醇稀释到10.00mL处，加人5%的亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀，放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL , 混匀，放置10min,再加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL, 2.6.2 较佳 准确称取3g处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别用2h、2.5h 、3h 、3.5h提取时间用60mL、85%的乙醇对3g金星厥科叶样品在水浴温度为80℃下回流提取，乙醇提取液的处理方法如前，测定其吸光度， 2.6.3 较佳提取温度的 称取3g处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别在75℃、 80℃、85℃、 90℃的水浴温度下用60mL、85%的乙醇对3g金星厥科叶样品回流提取2.5h，乙醇提取液的 2.6.4较佳物料比的确定 称取3g处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别用30mL、45mL 、60mL、75mL 、90mL的85%的乙醇溶液在水浴温度为85℃下对3g金星厥科叶样品回流提取2.5h，乙醇提取液的处理方法如前，测定其吸光度， 3.7 叶绿素对黄酮类物质的影响 称取15g 金星厥科叶样品放于锥形瓶中用90mL的石油醚浸泡8个小时对其脱色，过滤、干燥。然后准确称取处理过的3g金星厥科叶样品用质量分数为85%的60mL乙醇溶液在水浴温度为85℃下对其回流提取2.5h，乙醇提取液的处理方法如前，测定其吸光度， 3.8 金星厥科叶中黄酮类化合物含量的测定 精密量取石油醚处理过的提取液0.50mL，置于25.00mL 的比色管中。加85%的乙醇稀释到10.00mL,加入5%的亚硝酸钠溶液0.8