浙江大学生物化学实验甲 用正交法测定几种因素对蔗糖酶活性的影响课程设计.pptVIP

用正交法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响 1、正交法简介 在生产实践中,试制新产品、改革新工艺、寻求好的生产条件等,都需要先做试验。 试验总要花费时间，消耗人力、物力、因此人们总希望做实验的次数尽量少，而得到的结果尽可能地好。 要达到这个目的，就必须事先对实验作合理的安排，也就是要进行试验设计。 实际问题是复杂的，对实验有影响的因素往往是多方面的。 用正交法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响 有时，由于时间过长，条件改变，还会使试验失败。 人们在长期的实践中发现，要得到理想的结果，并不需要进行全面试验，即使因素个数、水平都不太多，也不必作全面试验。 我们总是希望在不影响试验结果的前提下，尽可能的减少试验次数，正交试验设计就是解决这个问题的有效方法。 2、正交法的原理 用正交法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响 正交试验设计的主要工具是正交表。 正交试验设计是通过借助于正交表，简化表格计算，正确分析结果，从而找到试验的最佳条件，分清因素的主次，这样就可以通过比较少的试验次数达到好的试验效果。 实践证明，正交法是一种多、快、好、省的方法，目前已被广泛应用于工农业生产和科学试验中。 本试验运用正交法测定底物浓度、酶浓度、温度、pH值这四个因素对蔗糖酶活性的影响，并求得在什么样的底物浓度、酶浓度、温度和pH值时酶活力最大。 用正交法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响 3、正交法的设计过程（以本试验为例） 1、根据试验目的，确定要考核的试验指标。 2、确定要考察的试验因素和各因素水平。 要通过对实际问题的具体分析选出主要因素，略去次要因素，这样可使因素的个数少些，从而减少试验次数和计算。 本试验取四个因素，即底物浓度[s]、酶浓度[E]、温度、pH值。每个因素选三个水平（水平即在因素的允许变化范围内，要进行试验的“点”）。试验因素和选用水平如表1所示。 用正交法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响 作因素、水平表时，各因素的水平最好不要按大小顺序排列。 如按一般方法，对四个因素三个水平的各种搭配都要考虑，共需做34=81次试验，而用正交表只需做9次试验。 因素 水平 [s](ml) [E](ml) 温度（℃） pH 1 0.5 0.8 50 3.6 2 0.2 0.5 37 5.6 3 0.8 0.2 65 4.6 表1 因素、水平表 用正交法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响 3、选择合适的正交表 首先根据各因素的水平选择相应水平的正交表，同水平的正交表有好几个，究竟选哪一个要看因素的个数， 一般只要正交表中因素的个数比试验要考察的因素的个数稍大或相等就行了。这样既能保证达到试验目的，而试验的次数又不至于太多，省工省时。 用正交法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响 正交表的表示：正交表 Ln（tq） L：正交表的代号； n：处理数（试验次数） t：水平数； q：因素数 试验次数n=q（t-1）+1 本试验选用四因素，每个因素选三个水平，因此可选用正交表L9（34）。 4、在所选的正交表上进行表头设计 把因素放入正交表头的工作，叫做表头设计。 用正交法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响 如本试验是一项四因素各三水平的试验，因此表头设计时，可将四个因素依次放在L9（34）的第1，2，3，4列上。见表2所示。 表2 表头设计 1 2 3 3 9 3 1 2 3 8 2 3 1 3 7 2 1 3 2 6 1 3 2 2 5 3 2 1 2 4 3 3 3 1 3 2 2 2 1 2 1 1 1 1 1 4 3 2 1 水平 因素试验号 用正交法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响 正交表都具有以下两个特性： a、在每一列中，各水平出现的次数相等，即在任何一列中，数字1、数字2和数字3都出现三次（几个水平就均出现几次） b、任何两列中，横行组成的数对出现的次数相等，均出现一次（这里有9个不同的数对，均出现一次），即（1，1）、（1，2）、（1，3）、（2，1）、（2，2）、（2，3）、（3，1）、（3，2）、（3，3）各出现一次。 用正交法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响 以上这些特点保证了用正交表安排的试验计划是均衡搭配的，因此分析数据比较方便，可进行综合比较，结果比较可靠。 4、 酶活力的测定原理 还原糖 + 3，5-二硝基水杨酸 糖酸 + 氨基化合物 OH- △ 红棕色，540nm处具特征光吸收，OD540值与还原糖含量成正比，可据此进行比色测定。 （DNS试剂） 蔗糖 葡萄糖 + 果糖 蔗糖酶 H2O CH2OH OH O OH OH HO CH2O