慢病毒使用中的问题及解答（FAQ）.PDFVIP

慢病毒使用中的问题及解答（FAQ） 1、对照病毒或目的病毒感染细胞以后，细胞形态发生改变或者细胞死亡，是否说明病毒有 毒性? RE：首先，确定病毒是否有污染； 1）细菌污染 病毒用 Millipore 0.22um 滤器过滤去除细菌； 2）真菌污染 病毒直接丢弃 3）支原体污染 细胞间质有黑点，黑点运动状，寄送抗支原体试剂试用装 4）细胞碎片 感染后换液几次去除细胞碎片 其次，确定病毒感染 MOI 是否过高，梯度稀释后感染，寻找合适的 MOI。 同时考虑目的细胞可能比较敏感，更换其它细胞感染确定病毒是否有问题。病毒对某些 敏感细胞有毒性可能是不可避免的。 如果以上都排除后细胞状态仍然不好，尝试增加血清含量，观察细胞状态是否好转。 2、病毒感染目的细胞感染不上或效率低？ RE：病毒感染效率和以下几个因素有关， 1）病毒活性 解冻病毒一定要在冰上进行，尽量避免反复冻融，冻融会影响病毒滴度。- 80℃保存半年以上需要重新测滴度； 2）目的细胞 最好预实验测试过，看病毒载体是否合适感染目的细胞。一些难感染的细胞， 如贴壁不好的细胞，原代细胞等，或者体内动物实验适合用腺病毒； 3） MOI 值 一般来说 MOI 都是要用梯度法