霍山石斛基源植物鉴定技术规程征求意见稿.doc

LY/T ××××—×××× LY/T ××××—×××× PAGE 6 PAGE I 国家林业局 发布××××-××-××实施霍山石斛基源植物鉴定技术规程 国家林业局 发布 ××××-××-××实施 霍山石斛基源植物鉴定技术规程 （征求意见稿） Technical Regulations for Original Species of Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng ××××-××-××发布 LY/T ××××—×××× 中华人民共和国林业行业标准 LY ICS B 备案号： 前 言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的法规编写。 本标准由安徽省林业厅提出。 本标准由国家林业局归口。 本标准起草单位：皖西学院、金寨永惠康有机农业科技有限公司、九仙尊霍山石斛股份有限公司、霍山县天下泽雨生物科技发展有限公司、霍山县长冲中药材开发有限公司、金寨县茶业协会、山东博华生态农业科技有限公司、海南胜嵘生物科技有限公司、安徽霍山县亿康中药材科技发展有限公司、金寨县金泽石斛种植专业合作社、安徽颂褀生物科技开发有限公司。 本标准主要起草人：韩邦兴、赵群、戴任、宋向文、陈乃富、陈乃东、戴亚峰、张军、张质彬、陈晋銮、陈存武、王炳星、姚厚军、戴军、宫汝路、何祥林、翟红莲、李俊、李义鹏、张家泽、苏亚平、储蓄、赵红霞、姚皖湘。 霍山石斛基源植物鉴定技术规程 1 范围 本部分规定了霍山石斛（Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng）基源植物鉴定的技术，包括性状、分子鉴定技术。 本标准适用于霍山石斛基源植物的鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 DB 34/T486霍山石斛 ZGZYXH/T6-2015 道地药材霍山石斛 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 特异性引物 (specific primer) 由人工合成，特异性、稳定性、重复性等综合特性好，用于霍山石斛分子鉴定必须选用的引物。 3.2 标准物种的特异性序列（the specific sequence of reference species） 标准物种的特征符合ZGZYXH/T6-2015中描述的霍山石斛特征。标准物种的特异性序列是指用特异性引物扩增出的霍山石斛DNA片段，该片段长度为171 bp。 4 鉴定技术 4.1 性状鉴定 4.1.1　茎 4～5条丛生，肉质，从基部上方向上逐渐变细，不分枝，具节，淡黄绿色，有时带淡紫红色斑点，干后淡黄色。 4.1.2　叶 4～5片，薄革质，长圆状披针形至披针形，斜出，基部具抱茎的鞘；叶鞘膜质，宿存。 4.1.3 花 4.1.3.1 花序 野生霍山石斛单花，顶生，直立；栽培霍山石斛总状花序1～3个，从落叶的老茎上部发出，具1～2朵花；花苞片浅白色带栗色。 4.1.3.2 花色 淡黄绿色，肉质，有香气。 4.1.3.3 花萼 中萼片卵状披针形；侧萼片镰状披针形，基部歪斜；萼囊近矩形，末端草绿色近圆形。 4.1.3.4 花瓣 卵状长圆形；唇瓣近菱形，长和宽约相等，基部楔形并且具1个胼胝体，上部稍3裂，两侧裂片之间密生短毛，近基部处密生长白毛；中裂片半圆状三角形，基部密生长白毛并且具1个黄色横椭圆形的斑块。 4.1.3.5 蕊柱 淡绿色；蕊柱足基部黄色，密生长白毛。 4.1.3.6 药帽 绿白色，近半球形，顶端微凹，前缘有流苏状裂，表面有毛状突起。 4.1.3.7 子房 连花柱长1.5cm左右，黄绿色。 4.1.4 果实 蒴果黄绿色。 4.1.5　种子 种子白色，细小。 4.2 分子鉴定 4.2.1　仪器设备及试剂 仪器设备及试剂见附录A。 4.2.2　溶液配制 溶液配制方法见附录B。 4.2.3　引物 通用引物TY2s：5’- CGCCATATTGATTGACACG -3’ 通用引物TY2a：5’- GGCAGCCAACGAGAAGA -3’ 特异性引物CP2s：5’- TTCGTGGGATGGGGTTC -3’ 特异性引物CP2a：5’- TGCACATCCGAGCCTGA -3’ 特异性引物HuoS：5’- AAAAGGGATAGGTGC -3’ 特异性引物HuoA：5’- GATTTGGGTTGTGATT -3’ 以上所有引物均来自于专利201610846153.7（见附录C）。 4.2.4　操作程序 4.2.4.1 样品准备 随机抽取5至10个个体分别取样。对于干燥样品，取50