喜牛跌西卫生防寝站-VirologicaSinica.PDF

维普资讯 fz一／； zI王；) 第l2卷~2ilI 中 国 病 毒 学 vdly No2 1997年 6月 VIROLOGICA SINICA jun 1997 肾综合征出血热病毒在恙螨体内增殖的动态观察 - — — — — — ～ 。 值京 俭 岘37。z 跌(西省卫生防寝站7111o54) 喜．牛 ， 西安 【V ，T l 提 要 取饲养的小盾纤恙螨铀虫和若虫，每 2Od为一批制成无苗德渡接种 VertyE6细胞测定 HFRSV滴度．动态现察 HFRSV在螨体内的增殖情况，并用 PCR技术检测恙螨幼虫和若虫体内 HFRSVRNA 结果如下：小盾纤恙螨幼虫期豫 60d一批 外，其余 各批 均在不同时间 内测 出 HFRSV滴度．3批若虫中亦有 2批测出HFRSV滴度并检测到 HFRSV—RNA。结果为小盾纤羞螨 肾综合征 出 血热病毒(瑚PRsV)．结果说明小盾纤恙螨可自然感染、叮刺传播和经卵传递 HFRSV。为进一 步观察恙螨体 内HFRSV的增殖情况，动态观察了恙螨体内HFRSV的TCII3~滴度，并用PCR 技术检测恙螨体内HFRSV—RNA。现将结果报告如下： 材料和方法 1 实验材料 11 恙螨来源 于小盾纤蒜螨密度高峰的 iO月份．在陕西省历年来 HFRS发病率及 鼠带毒率高的户县 HFRS疫区，采用两法采集：(1)从鼠体采集：晚何在野外布放鼠夹．次晨收回．将从鼠体 自行爬下的饱食恙螨 幼虫置于饲养管中饲养．以饲养的幼虫 、若虫供实验用。(2)用小黑板采集：选择晴天，于 10h至 16h将小黑 板放于野外草丛中．10min后收回检查。用采集的未食蔷螨幼虫叮刺小白鼠乳鼠，待其饱食 自行爬下后，置饲 养管饲养备用。 1．2 Veto-E6细胞 由中国预防医学科学院病毒学研究所提供．用于测定 HFRSVTCI 。／ml测定。 13 引物的设计和合成 根据实验要求和引物设计原则，设计了HFRSV761l8株 eDNA中M基 因片段相 互朴的两十寡核酸引物： 正向引物；HFRSVcDNA440～459bp 匣向引物 ：HFRSVcDNA635～654h。 第一个引物的碱基组成 5 AATAGCACATACTGCAAGCC一3 收揞 日期：1996—05 27．修回日期：1996 12—06 国家 自然辩学基金资助项 目No：3947063I 维普资讯 第2期 张 云等：肾综合征出血热病毒在恙蟒体内增殖的动态观察 133 第二个引物的碱基组成为5_c丌 GcTATAGCAAAGATCCC一3 两引物之何距离为215bp。将该引物输入PCR引物设计，PCRDESNA程序验证符合引物设计要求。用 APPliedBiosystenm公司的381ADNASynthesizer仪合成该对引物．并经过柱纯化 真空冷冻干燥后备用。 14 PCR试剂盒 AMV-逆转录酵、10xPCR缓冲液、dNTPs和 Taq酶均为上海复旦大学产 品。