课件：肺炎链球菌的分离和鉴定.pptVIP

（2）分离培养 1）标本处理 及时将采集标本接种到适当的培养基上是提高分离率的前提。因为，肺炎链球菌对干燥、对寒冷的抵抗力均较弱，在标本离开机体暴露于外界复杂的环境中，其存活率十分低，不及时接种适当培养基是导致分离率低的主要原因。 2019 - * 2）选择性分离培养基 培养基中添加5μg/ml庆大霉素有利于肺炎链球菌的分离。 2019 - * 3） 培养环境 5～10％CO2、35℃培养24～48h。 2019 - * （3）肺炎链球菌的菌落形态 在营养丰富的培养基上，肺炎链球菌形成扁平、中间有凹陷的典型菌落，少数菌可呈粘液型菌落。 2019 - * 2019 - * 2019 - * 2019 - * 2019 - * 2019 - * 2019 - * 2019 - * 3.抗原结构 （1）种属特异性抗原：为菌体多糖抗原，存在于肺炎链球菌的细胞壁。 （2）型特异性抗原：是存在于肺炎链球菌荚膜中的一种多糖多聚体，可溶于水，据此抗原可将肺炎链球菌分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……等个型，其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型致病性最强。 （3）菌体核蛋白抗原：存在于菌体深部，为蛋白质，无特异性。 2019 - * 二、肺炎链球菌鉴定 肺炎链球菌的鉴定，主要应与甲型溶血性链球菌鉴别。其中以胆汁溶菌试验、菊糖发酵和optochin试验最为常用。必要时可作荚膜肿胀试验或小鼠毒力试验加以鉴别。在上述试验中，肺炎链球菌均应阳性，而甲型溶血性链球菌为阴性。也可用特异性单克隆乳胶或自动化仪器等相应鉴定卡作鉴定。 2019 - * 肺 炎 链 球 菌 鉴 定 要 点 革 兰 阳 性 双 球 菌， 矛 头 状， 不 呈 链； 血 平 皿 菌 落 呈 草 绿 溶 血， 湿 润， 菌 落 表 面 无 小 白 点； 培 养 时 间 长 出 现 脐 窝 状； 胆汁溶解试验阳性； 荚膜肿胀试验阳性； 乳 胶 单 克 隆 抗 体 凝 集 阳 性。 2019 - * 1. 溶血性检查 肺炎链球菌在厌氧或二氧化碳环境中溶血能力大大加强，草绿色溶血环很大，可与其他草绿色链球菌相区别。 2019 - * 2. Optochin(OP，奥普托欣)敏感试验 该药对肺炎链球菌的作用机制是干扰其叶酸的合成。 optochin敏感试验方法是药敏试验。挑取被检菌，密涂于血平板上，贴上含5μg/片的optochin纸片，置5~10%CO2的大气中（或烛缸），35℃孵育过夜。抑菌环直径=14mm为敏感，推断为肺炎链球菌。抑菌环直径14mm时参照胆汁溶菌试验。肺炎链球菌的抑制圈直径常在20mm以上，甲型溶血性链球菌（约98%）小于12mm。 2019 - * 也有例外，我们在实际工作中检出过耐optochin的肺炎链球菌，并发现大多数的缓症链球菌和部分口腔链球菌对optochin的抑菌环直径=14mm。应注意鉴别。 但大多数肺炎链球菌对苯唑西林（Oxacillin,OX）是敏感的(除外PRP)，而缓症链球菌和口腔链球菌对OX耐药。这可作为辅助鉴别点。 2019 - * 2019 - * 2019 - * 2019 - * 2019 - * 2019 - * 3. 胆汁溶菌试验 自溶酶是一种L-丙氨酸--N-乙酰胞壁酰胺酶，能切断肽聚糖上L-丙氨酸与N-乙酰胞壁酸间的连接键，从而破坏细胞壁，使菌溶解。 自溶酶在菌生长的稳定期被激活，也可被胆汁或胆盐等活性物质激活，从而促进培养物中的菌体溶解。肺炎链球菌胆汁溶菌试验为阳性，甲型溶血性链球菌的胆汁溶菌试验为阴性。 2019 - * （1）试管法: 取新鲜培养物分装于两支试管内（每支1ml），其中一支加入10%的去氧胆酸钠溶液0.1ml或纯牛胆汁0.2ml，另一支加入无菌盐水两滴（对照），15min后，阳性者细菌被溶解，试管内液体呈透明状，阴性者无变化。 2019 - * 2019 - * （2）平皿法: 加一滴10%的去氧胆酸钠溶液或纯牛胆汁于被检菌菌苔上，15min后，阳性者细菌菌苔被溶解，阴性者无变化。试验应有已知肺炎链球菌作阳性对照。 2019 - * - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 肺炎链球菌的分