课件：第八章位点特异性重组与的转座.ppt

4. 反转录病毒和反转座子 转座子是基因组中独立的可移动的DNA序列。从DNA到DNA的转移称为转座。从DNA到RNA再到DNA的转移称为反转座。反转座是由RNA介导的转座过程。 以RNA为中间体的转座为真核生物所特有。反转录病毒能将其RNA基因组的DNA拷贝以原病毒的形式整合到宿主基因组中。一些真核生物转座子的结构与原病毒的结构有关，并且通过RNA中间体进行转座，这一结构单位称为反转录转座子(retrotransposons) 或反转录子(retroposons)。 （1）反转录病毒及其生活周期 ◆ 反转录病毒具有单链 RNA基因组 每个病毒颗粒包装有两个RNA基因组，因此，单一病毒颗粒实际上是二倍体。 ◆ 反转录病毒生活周期 反转录病毒（正链病毒）感染细菌——病毒RNA反转录DNA（负链DNA）——催化合成第二条DNA链（正链DNA）——整合到宿主DNA中成为原病毒——转录生成病毒基因组RNA(转录出病毒mRNA、翻译成病毒蛋白质或者作为子代病毒基因组） 反转录病毒生活周期 （2）反转录病毒基因组结构与功能 ◆ 含有3-4个基因，实为编码区，每各编码区通过加工产生多种蛋白（多聚蛋白），经酶切成为单一的蛋白质形式。 ◆反转录病毒mRNA通常结构，5 ’端加帽，3’端与polyA相连。 ◆全长的mRNA被翻译时，产物为gag和pol 蛋白。翻译从第一个起始密码子开始而终止于第一个终止密码子，产物为gag蛋白。表达pol 蛋白必需越过终止密码子，效率为5%，因此，gag蛋白是gag-pol蛋白的20倍。 ◆经剪切产生一个短的亚基因组 (subgenomic) 的 mRNA，其表达产物为env。 反转录病毒“基因”的表达 （3）反转录病毒的结构形式 ◆ 病毒基因组RNA结构 两个末端有正向重复序列R (10-80bp) ，5 ’端R之后是 U5 (80-100bp) ；3’端R内侧是U3 (170-1260bp)。 ◆病毒线形双链DNA结构 5 ’端加U3，3’端加U5。 U5—R—U3 称为长末端重复（LTR）。 ◆ 原病毒RNA结构（类似转座子） U3和U5末端丢失2bp，靶DNA两侧产生4-6bp重复序列 LTR的结构 （4）病毒线性DNA整合到宿主基因组 ◆ 整合过程由整合酶催化，在3’端切除CA两个碱基，成为粘性末端。 ◆ 靶位点随机选择，交错切割5 ’端4-6个碱基。 ◆ 整合酶将LTR 3’端与靶DNA 5 ’端连接。 ◆ 一个连续感染的细胞可获得1-10个原病毒。 ◆ 每个LTR的U3有一个启动子，左侧LTR中的启动子发起与整合位点相连接的宿主序列的转录。这个LTR带有一个增强子，可以作用于细胞和病毒的序列。一个反转录病毒的整合可能使某些基因激活，使宿主细胞转变为肿瘤细胞。 （5）病毒类反转座子 反转录病毒是反转座子的范例，其转座能力是由于能编码反转录酶和整合酶。 反转座子和反转录病毒的区别在于其不经特异的感染形式，但转座机制相似。 反转座子分为两类：病毒类反转座子和非病毒类反转座子。 （6）非病毒类反转座子 ◆ 非病毒类反转座子的内部和外部结构它们来源于RNA序列，是细胞内发生了突变基因的产物。可以假定它们是负责转座的酶系统的底物，但它们不编码有转座功能的蛋白质。 ◆ 哺乳动物基因组中，有一类核苷酸序列高度相似的重复序列，主要是基因以外的DNA序列。可分为串联重复序列和散在重复序列。它们多来源于RNA介导的转座过程，来源于反转录转座子。 散在重复序列是中度重复序列，根据重复序列的长度分为两类：短散在重复序列( SINEs )和长散在重复序列( LINEs )。 ◆ 短散在重复序列( SINEs )长度在500bp以下，人基因 组中有10万以上拷贝。 长散在重复序列( LINEs ) 长度在1000bp以上，人基因组中有上万拷贝。◆ Alu是SINE家族的典型代表，人基因组中有50万-100万个拷贝，平均每隔4Kb就有一个Alu序列。 典型的Alu序列长282bp有内切酶Alu的识别序列ACCT。 在非洲录猴、小鼠、中国仓鼠中也发现Alu序列。 ◆ Alu序列由两个同源的但序列有差异的亚基组成，亚基来源于发生了缺失突变和点突变的7SL RNA基因，7SL是信号识别颗