蔗糖╱D-葡萄糖测定试剂盒.doc

BOEHRINGER MANNHEIM r-biopharm 蔗糖/D-葡萄糖测定试剂盒(酶学方法) Cat. No.:E0139 041规格:40次检测 紫外分光光度检测: 用于检测食品中的蔗糖、D-葡萄糖，例如：啤酒、一般的饮料（软饮料和柠檬汁）、面包类食品、糖果类产品、巧克力、咖啡、乳制品（例甜点、加糖浓缩牛奶）、蛋类、水果和蔬菜（例马铃薯）及相关产品（果汁、果酱）、蜂蜜、冰淇淋、肉类产品（肉汤、酱油、香肠、汤）、芥末、胡椒、茶品及所有含“糖”食品。也可用于动物饲料、纸、药品、烟草、动物样品的相关检测。 2．被检测物： 植物新陈代谢中蔗糖占有重要位置,从青篱竹和甜菜根中进行分离具有巨大的经济意义。当蔗糖被水解或转化时,会形成D-葡萄糖和D-果糖。蔗糖是食品的重要成分,它不仅具有经济价值,且是重要的增甜剂。 在动植物界中D-葡萄糖广泛存在。它是碳水化合物新陈代谢的必要组分且常以游离形式同D-果糖和蔗糖共存。但更重要的存在形式是二-,三-,寡-和多糖(乳糖、麦芽糖、蔗糖；棉籽糖；糊精；淀粉；纤维素)。 3．原 理： 蔗糖＋H2O—β-果糖苷酶—D－葡萄糖＋D－果糖X D－葡萄糖＋ATP－HK－G-6-P+ADPX G-6-P+NADP+—G-6P-DH—D-葡萄糖酸盐-6-P+NADPH+H+X 4．特异性： β-果糖苷酶水解蔗糖及其它寡糖苷中的β-果糖苷键： 若样品只含有蔗糖，可特异性检测D-葡萄糖。 若酶水解后D-葡萄糖和D-果糖被检出且这些单糖的比例为1：1，那么即使有果聚糖存在，也能特异性检出蔗糖。如果D-果糖比例大，那么样品中存在2β-果聚糖。“多聚果糖”（例菊糖）没有被水解。D-葡萄糖的检测是特异性的。 5．灵敏度及检测限： 检测D-葡萄糖灵敏度为0.005个吸光单位,样品体积为V=2.000ml。若在340nm下检测，此时的D－葡萄糖浓度为0.2mg/l样品溶液。0.4mg/l的检测限是由0.010(340nm)的光吸收区分度而来,最大样品体积为2.000ml。 在测定蔗糖（样品溶液中存在D-葡萄糖）时，灵敏度是0.010个光吸收单位，样品体积V=1.800ml。若在340nm下检测，此时的蔗糖浓度为1mg/l样品溶液。2mg/l的检测限是由0.020(340nm)的光吸收区分度而来,最大样品体积为1.800ml。 6．线 性 检测线范围从4ug蔗糖＋D－葡萄糖/检测（2mg蔗糖＋D－葡萄糖/l样品溶液; V=1.800ml）到150ug 蔗糖＋D－葡萄糖/检测（1.5g蔗糖＋D－葡萄糖/l样品溶液；V＝0.100ml）。 7．精 度： 检测D－葡萄糖中用一个样品溶液进行重复时，可能会产生0.005~0.010个吸光单位的差异。 检测蔗糖中（样品溶液中存在D－葡萄糖）用一个样品溶液进行重复时，可能会产生0.010~0.015个吸光单位的差异。 在测量范围内相对标准偏差（变化系数）约为1～3％。 猪肉肠分析（参考2.6）： 蔗 糖： x=1g/100g r=0.079g/100g; s(r)=?0.028g/100g R=0.086g/100g; s(R)=?0.030g/100g D－葡萄糖： x=0.5g/100g r=0.031g/100g; s(r)=?0.011g/100g R=0.032g/100g; s(R)=0.011g/100g 果汁中蔗糖（参考2.6）： r=1.9+0.033?(C蔗糖g/l)g/l R=3.3+0.061? (C蔗糖g/l)g/l 苹果汁中蔗糖： r=1.9g/l; R=3.2g/l 黑葡萄酒： r=3.2g/l; R=5.6g/l 杏 乳： r=3.9g/l; R=6.9g/l （改进样品制备后） r=0.4g/l; R=0.9g/l UHT-可可饮料/冰淇淋: 蔗 糖： x=1～5g/100g ； r=0.13g/100g； R=0.08g/100g x=约15g/100g； r=0.40g/100g； R=0.28g/100g D－葡萄糖： x=0.1～0.5g/100g r=0.06g/100g; R=0.06g/100g 8．试剂盒内容物： . 1.三乙醇胺缓冲液，PH约7.6；NADP,约110mg; ATP约260mg。 2.HK（己糖激酶），约320U； G-6P-DH(葡萄糖－6－磷酸－脱氢酶)，约160U。 3.柠檬酸缓冲液， PH约4.6；β－果糖苷酶，约720U。 4.检测质控用蔗糖标准样（对计算结果而言，标准样的测定不是必须的）。 5.检测质