兔抗狨猴IgGHRP标记抗体的制备及初步鉴定-中国动物学报.PDF

２０１８年６月 中国比较医学杂志 Ｊｕｎｅ，２０１８ 第２８卷　 第６期 ＣＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｖｏｌ． ２８　 Ｎｏ． ６ 技术方法 兔抗狨猴 ＩｇＧ⁃ＨＲＰ标记抗体的制备及初步鉴定 丛日旭，刘先菊，滕永康，向志光，佟　 巍，张丽芳，阮研硕，刘云波∗ （中国医学科学院医学实验动物研究所，北京　 １０００２１） 　 　 【摘要】　 目的　 狨猴血清中纯化ＩｇＧ抗体，制备兔抗狨猴抗血清，并纯化抗血清中ＩｇＧ，ＨＲＰ（辣根过氧化物 ＴＭ 酶）标记兔抗狨猴ＩｇＧ。 方法　 ＨｉＴｒａｐ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清ＩｇＧ，十二烷基硫酸钠聚丙烯 酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ）进行纯度鉴定，免疫琼脂双扩散法（ｄｏｕｂｌｅ ｉｍｍｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ａｓｓａｙ）测定制备的兔抗狨猴 抗血清效价，改良“简易过碘酸钠标记法”制备兔抗狨猴ＩｇＧ⁃ＨＲＰ标记抗体，酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）及蛋白 免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）对兔抗狨猴ＩｇＧ⁃ＨＲＰ标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定。 结果　 狨猴和兔抗 狨猴血清纯化ＩｇＧ纯度分别大于９５％、９７％；兔抗狨猴ＩｇＧ抗血清的效价为１∶６４。 ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定了 兔抗狨猴ＩｇＧ⁃ＨＲＰ酶标抗体参考工作浓度为１∶２５６０００、１∶１５０００，特异性明显。 结论　 制备狨猴ＩｇＧ⁃ＨＲＰ标记抗 体并初步鉴定，包括ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 的特异性及使用浓度，为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学 检测体系储备了资源。 【关键词】　 狨猴；抗体制备；酶标抗体 【中图分类号】 Ｒ⁃３３　 　 【文献标识码】 Ａ　 　 【文章编号】１６７１⁃７８５６（２０１８）０６⁃０１０１⁃０５ ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－７８５６ ２０１８０６０１８ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ⁃ｍａｒｍｏｓｅｔ ＩｇＧ⁃ＨＲＰ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＯＮＧ Ｒｉｘｕ，ＬＩＵ Ｘｉａｎｊｕ，ＴＥＮＧＹｏｎｇｋａｎｇ，ＸＩＡＮＧＺｈｉｇｕａｎｇ，ＴＯＮＧＷｅｉ，ＺＨＡＮＧ Ｌｉｆａｎｇ，ＲＵＡＮ Ｙａｎｓｈｕｏ，ＬＩＵ Ｙｕｎｂｏ∗ （Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （ＣＡＭＳ） ＆ Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌａｇｅ （ＰＵＭＣ），Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２１，Ｃｈｉｎａ） 　 　 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｏ ｐｕｒｉｆｙ ｍａｒｍｏｓｅｔ ｓｅｒｕｍ ＩｇＧ，ｐｒｅｐａｒｅ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ａｎｔｉｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ⁃ ｍａｒｍｏｓｅｔ ａｎｔｉｂｏｄ