纯化线粒体磷氧比（ADPO）定量检测试剂盒产品说明书（中.PDFVIP

纯化线粒体磷氧比（ADP/O ）定量检测试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 纯化线粒体磷氧比（ADP/O ）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system ） 测定新鲜活体线粒体在已知浓度 ADP 存在（III 态呼吸）的情况下氧浓度的降低，来分析磷氧比（P ：O ratio ）， 以评价线粒体呼吸链和氧化磷酸化偶联程度，即能量转化效率的权威而经典的技术方法。该技术由大师级 科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。产品严格无菌， 即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。 技术背景 线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体，即线粒体的呼 吸耗氧偶联着ADP与Pi合成ATP 的磷酸化反应。线粒体每吸收一克原子氧的同时，生长ATP （ADP磷酸化） 的克分子数的比值，为ADP/O值。线粒体的磷氧比直接表征线粒体呼吸耗氧和ATP合成的关系。正常线粒 体的ADP/O （P/O ）为1.5：磷氧比降低意味着线粒体解偶联；磷氧比增高意味着线粒体偶联良好。其最大 值为3.3 。 产品内容 介质液（Reagent A ） xx 毫升 底物液（Reagent C ） xx 微升 产品说明书 1份 保存方式 保存在－20 ℃冰箱里，有效保证 6 月 用户自备 CLARK 氧电极仪：用于测定溶解氧浓度 实验步骤 实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20 ℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到 25 ℃。然后进行下列操作。 1． 加入 xx 毫升介质液（Reagent A ）到反应玻璃槽 2 ． 使用微型磁力子搅拌，充分混匀 3 ． 密封反应槽 4 ． 开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为 0.240 微摩尔分子氧/毫升（25 ℃） 5 ． 持续记录 1 分钟后，注射加入 20 微升待测的线粒体（总量 2 毫克）（注意：氧浓度可能瞬时增加 5 ％） 1 6 ． 持续记录 1 分钟后，注射加入 xx 微升底物液（Reagent B ）（注意： 氧浓度在 10 秒钟内开 始下滑；参见注意事项 9 ） 7 ． 持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点 8． 继续注射加入 xx 微升 底物液（Reagent B ）（注意：氧浓度在 10 秒钟内开始下滑） 9 ． 持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点 10．测算氧浓度降低值（微摩尔/毫升）： 【（第一次加入底物前的氧浓度－第一次下行斜线拐点时的氧浓度）＋（第二次加入底物前的氧浓度－第 二次下行斜线拐点时的氧浓度）】÷2 （实验次数） 11．计算ADP/O ： 0.2 微摩尔（ADP 浓度）÷ 【氧浓度降低值（微摩尔/毫升）X xx （反应体系容量；毫升）X xx （氧分子数）】 注意事项 1． 本产品为 20 次操作 2 ． 操作时，须戴手套 3 ． 确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入 4 ． 线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用线 粒体分离试剂盒－10006.1 5 ． 注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入 6 ． 避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注 10 微升 7 ． 保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高 8． 反应液充分混匀，和环境氧保持平衡 9 ． 加注 底物液（Reagent B ）前，须充分冻融和混匀 10．严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量 11．本公司提供系列线粒体检测试剂产品 质量标准 1． 本产品经鉴定性能稳定 2 ． 本产品经鉴定检测敏感 2