南京大学分子生物学第23讲.pptVIP

3，酵母接合型相关匣子 （1）序列组成（表9-1） （2）沉寂匣子的阻遏蛋白及其结合位点 （3）沉寂匣子不活跃转录的原因 （二）哺乳动物免疫球蛋白的表达与基因重排 1，轻链 （1）种类 （2）结构 （3）基因及基因重排 A，轻链的V，C，J（如Vκ，Cκ，Jκ）基因在不产生抗体的细胞中相距很远，在产生抗体的细胞中被排列组合重排在一起，V和C之间是较短的J片段。轻链V区是由V基因片段和J基因片段共同编码的 B， ?链的形成 C， ?链的形成 2，重链 （1）种类 （2）结构 （3）基因及基因重排 3，免疫球蛋白类型的转换 （1）抗体类型的转换现象 （2）抗体类型的转换的机制 二、染色体水平上的基因活化调节 （一）染色质的状态 1，非活性染色质的结构 2，活性染色质的结构 （二）开放染色质结构的形成 1，DNA结构的影响 2，组蛋白的修饰 （1）H1组蛋白的磷酸化 （2）核心组蛋白的修饰 A，核心组蛋白的乙酰基化 B，H2A组蛋白的泛素化 （3）其他DNA结合蛋白的作用 A，启动子上游调控因子 B，HMG结构域蛋白 （三）活性染色质的特征 1，DNA酶I敏感位点 （1）活跃基因的DNA酶I优先敏感性 （2）活跃基因DNA酶I优先敏感性区域的分布 （3）造成DNA酶I优先敏感性的原因 （4）DNA酶I优先敏感性与基因转录的时间关系 2， DNA酶I超敏感位点 （1）DNA酶I超敏感点及其定位方法 （2）超敏感点与基因活性的关系 （3）超敏感点与基因转录的时间关系 （4）超敏感点的特点 不是特定的碱基位置，而是一段100~200bp的DNA序列 至少一部分序列以游离DNA形式存在 可能有局部的解链 与其下游转录起始位点距离因基因而异 3，组蛋白H3巯基的暴露 正在转录的染色质中，组蛋白H3的110位的巯基暴露出来，表明转录活性存在于伸展的染色质中 （四）DNA的甲基化和去甲基化 1，真核生物基因组DNA甲基化 （1）真核生物DNA甲基化位点 真核生物DNA的mCpG是DNA甲基化的唯一形式 一般哺乳动物基因组5%的胞嘧啶甲基为mCpG，且在DNA双链对称出现， mCpG占全部CpG的70% （2）基因的甲基化状态 高度甲基化（如：女性的一条X染色体） 诱导的去甲基化（如：组织或发育阶段特异性表达基因） 持续低水平甲基化（如：持家基因） （3）DNA的甲基化状态 全甲基化 半甲基化 非甲基化 （4）用于甲基化研究的限制性内切酶（图9－8） HpaⅡ：识别并切割未甲基化的CCGG MspⅠ：识别并切割所有的CCGG 2，甲基化DNA的结合蛋白 （1）MeCP1：在体外结合至少12对mCpG，是参与甲基化对基因转录抑制的主要蛋白 （2）MeCP2：结合一个mCpG碱基对，生物学意义不详 3，DNA甲基化的转录抑制 （1）哺乳动物以CpG甲基化程度为标准的启动子分类 A，CpG岛启动子 在某些持家基因的启动子附近CG高度集中（较其他区域高10~20倍），形成长达0.5~3kb的富含CG区域，称为CpG岛。 CpG一般不能和MeCP1结合 B，组织特异性启动子 CpG相对较少，在大部分组织中为甲基化状态，受DNA甲基转移酶调节 （2） DNA甲基化与基因表达活性的负相关性 A，限制酶研究结果：活跃基因表现为甲基化不足 B，用5-氮胞苷人为造成去甲基化可诱导基因表达 C，在特异性表达某些基因的组织中，活化基因附近mCpG降低至其他组织中的30% D，有H1的压缩状态核小体中含有哺乳动物和DNA中80%的mCpG 4，DNA去甲基化位点的特点 （1）范围和DNA酶I优先敏感区域十分吻合 （2）只有一小部分CG二核苷酸对的去甲基化与基因激活有关，它们位于对基因表达关系十分密切的序列中 5， DNA甲基化位点的维持及去甲基化位点的产生 DNA甲基化酶可以识别半甲基化的CG二核苷酸对并使之完全甲基化 去甲基化可以由去甲基化酶催化产生，或是在DNA复制时甲基化酶未能在半甲基化处催化甲基化 6， DNA甲基化/去甲基化对基因活性调控的相对性 （1） DNA甲基化程度因物种而异 DNA甲基化随进化程度的提高而增强 （2） DNA甲基化/去甲基化对不同基因活性有不同影响 例子：非洲爪蟾rDNA的活性不受DNA甲基化/去甲基化的影响，而其他基因不同 原因：可能与转录所用的RNA聚合酶种类有关 第四节转录水平的调控 一、Britten-Davidson模型 （一）保证各种细胞类型表达“正确”的基因组合的方法 1，多拷贝基因的组织特异性调控 不同类型的细胞通过与细胞类型特异的方式控制多拷贝基因的表达 2，单拷贝基因的复合控制系统 （二）真核生物基因表达的复合控制系统 1，真核生物基因表达调控的基本要素（图9-9） （1）结构基因 （2