第一章基因工程概述.PDFVIP

《基因工程》复习资料  第一章 基因工程概述 华东理工大学出版社 张惠展主编 基因工程（Genetic Engineering）的定义 是指按照人们的愿望，经过严密的设计，将一种或多种生物体（供体）的基因与载 体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体 （受体/宿主）内，使之按照人们的意愿 稳定遗传、并表达出新的性状的技术。 广义上是指 DNA 重组技术的产业化设计与应用， 包括上游技术和下游技术两大组成部 分。 上游技术指的是目的基因克隆、表达载体和工程菌（或细胞）的构建与分析。 下游技术基因工程菌或细胞的大规模培养以及表达产物的分离纯化过程。 基因工程概念的发展 遗传工程（Genetic  Engineering)→DNA 重组技术（DNA Recombination）→分子/基因克 隆 （Molecular/Gene Cloning）→基因工程（Gene/ Genetic Engineering) →基因操 作（Gene Manipulation) 应用领域以“基因工程”、“DNA 重组”为主 基因工程的历史性事件  1973：Boyer 和 Cohen 建立 DNA 重组技术  1978：Genetech 公司在大肠杆菌中表达出胰岛素  1982：世界上第一个基因工程药物重组人胰岛素上市  1988：PCR 技术诞生  1989：我国第一个基因工程药物 rhIFN α1b 上市  2003:  世界上第一个基因治疗药物重组腺病毒­p53 上市 基因工程的三大关键要素（元件） 基因：目的基因（ Vs 用途, interesting/target gene）、外源基因（Vs 宿主, foreign gene） 载体：能将外源基因带入受体细胞，并能维持的DNA 分子。 受体：宿主，能摄取外源 DNA、并能使其稳定维持的细胞（组织、器官或个体）。 基因工程的基本过程：切、接、转、增、检 （如图示） 1  《基因工程》复习资料  第二章 分子克隆 一．用于核酸操作的工具酶  1．限制性核酸内切酶  *识别双链 DNA 分子中的特定序列，并切割 DNA双链  *主要存在于原核细菌中，帮助细菌限制外来 DNA 的入侵  *基因工程中主要应用 II型酶  *基因工程中的作用：体外切割基因和载体  2．II型限制性核酸内切酶  *识别序列特征：回文结构（旋转对称结构）  *切割产物末端：５突出末端、３突出末端、平头末端  *最适温度：大多为３ ７度  *适盐浓度：高盐、中盐、低盐  *星号反应：当反应条件不适合时，识别和切割序列发生变化  3．限制性核酸内切酶的命名（举例） 属名 种名 株名  Haemophilus influenzae d  嗜血流感杆菌  d株  H i n d   III  H i n d        III  III 表示 同一菌株中所含的多个不同的限制性核酸内切酶  4．限制性核酸内切酶的分类 同裂酶：识别位点与切割位点均相同的不同来源的酶 同尾酶：识别位点不同，但切出的ＤＮＡ片段具有相同的末端序列 同尾酶的切割产物互为粘性末端，并能连接，但连接后二个酶的识别序列均被破坏。  5．连接酶 功能：体外连接ＤＮＡ片段 常用的连接酶： Ｔ４ ＤＮＡ连接酶 2  《基因工程》复习资料  参与连接反应的基团： ３端羟基和５端磷酸基团，形成磷酸二酯键  DNA连接酶的基本性质 ：修复双链 DNA 上缺口处的磷酸二酯键、修复 RNA­DNA  杂合分子中 DNA 链上缺口处的磷酸二酯键、连接多个平头双链 DNA 分子  6．ＤＮＡ聚合酶 ＤＮＡ聚合酶主要功能： （１）ＤＮＡ聚合作用 （２