核酸类药物的生产.pptVIP

核酸类药物的生产 * * * * 1、 核酸药物的分类 2、核酸类药物的生产方法? 3、核酸类药物的生产实例? 4、核酸类药物的检测 5、核酸药物的应用? 主 要 内 容 核酸药物的分类 药理功能：有助于改善机体的物 质代谢和能量代谢平衡，加速受 损组织的修复，促使机体恢复 正常生理功能。 如：DNA、RNA、肌苷、ATP、 辅酶A、脱氧核苷酸、肌苷酸等。 获得：微生物发酵或从生物资源 中提取生产。 药理功能：治疗病毒、肿瘤、爱滋 病的重要药物，也是产生干扰素、 免疫抑制剂的临床药物。 如：三氟代胸苷、叠氮胸苷等。 获得：由自然结构的核酸类物质 通过半合成生产。 具有天然结构的核酸类物质 天然碱基、核苷、核苷酸 的类似物或聚合物 核酸类药物的生产方法 DNA主要存在于细胞核中，RNA主要存在于细胞质中。1、核酸的生产一般采用提取法，即从粉碎、破裂的生物组织细胞中通过一定的方法获取总DNA或总RNA。 2、获取大分子核酸的另一方法是人工合成，即利用化学的方法按照设定的核苷酸顺序逐一加入形成核酸。现已有核酸合成仪，但合成长度还有一定限制，并且该仪器价格昂贵。因此这种方法一般用于研究，不适合生产。 DNA和RNA的生产方法 核酸类药物的生产方法 核苷酸、核苷及碱基类似物的生产方法 1、酶解法 核酸类药物的生产方法 2、半合成法? 微生物发酵与化学合成并用。? 由于发酵法生产核苷的产率很高，因此可由发酵法生产核苷后经提取，精制再经磷酸化制取核苷酸。 方法：将核苷悬浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷却条件下加入氯化氧磷，进行磷酸化。从核苷生成5‘-核苷酸收率可达90%。 核苷酸、核苷及碱基类似物的生产方法 3、直接发酵法? 采用营养缺陷型菌株或营养缺陷型兼结构类似物抗性菌株来发酵大量生产目的核苷或核苷酸。 核酸类药物的生产实例? DNA的生产技术? 1、来源? 选用细胞核含量比例大的生物组织作为提取制备DNA的材料，如胰脏、脾、胸腺等。 ?2、提取原理? 细胞内的核酸通常是与蛋白质形成复合物——核糖核蛋白（RNP）和脱氧核糖核蛋白（DNP），这两种复合物在不同电解质溶液中的溶解度有较大差异。? 核酸类药物的生产实例? RNA的生产? 1、来源：微生物——酵母? ? 2、RNA的提取——等电沉淀法? 3、工艺过程? （1）预处理：压榨、除水? （2）提取：0.13%NaOH，使细胞壁变性，使核酸从细胞内释放出来? （3）中和、除菌体? （4）分离：等电点法，调pH2.5，使RNA沉淀下来? 洗涤、干燥 核酸类药物的生产实例 核酸类药物的生产实例 4.发酵法生产高含量RNA酵母及其RNA提取工艺流程 ATP制备? 基本工艺路线：? 核酸类药物的生产实例 辅酶A的生产? 核酸类药物的生产实例 1、DNA含量测定? DNA是磷酸和戊糖通过磷酸二酯键形成的长链，所以磷酸或戊糖的量正比例于DNA的量，可通过测定磷酸或戊糖的量来测定DNA的量，前者称为定磷法，后者称为定糖法。 （1）定磷法? 磷酸与钼酸反应生成磷钼酸，再转变为钼蓝，吸收峰在660nm。? （2）定糖法——二苯胺法?670nm? 2、RNA含量测定? （1）定磷法——二苯胺法，595nm? （2）定糖法——地衣二酚（苔黑酚）法? 3、核苷酸、核苷含量的测定?紫外分光光度法? 核酸类药物的检测 * * *