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第三节 蛋白质的结构
蛋白质的结构层次：一级结构、二级结构、超二级结构、结构域、三级结构、四级结构
蛋白质的一级结构
定义：一级结构是指蛋白质多肽链中的氨基酸排列顺序，包括肽链数目和二硫键位置。
蛋白质一级结构是高级结构的分子基础，它包含了决定蛋白质分子所有结构层次构象的全部信息。
肽键和肽链
肽键：一个氨基酸的α-羧基与另一个氨基酸的α-氨基之间脱去一分子水形成的共价键称为肽键。又称酰胺键。
肽链：多个氨基酸以肽键相连成链称肽链或多肽（二肽、三肽……多肽）
主链：--N—C—C—N—C—C—N—C—C—N—C—C—N-- 侧连：R
命名：氨基酸残基， N-末端 ，C-末端
表达：GASVLMKKRE……
二硫键 -S-S-
(2) 蛋白质的一级结构测定片段重叠法
A. 原理：
N -A-B-C-D-E-F-G-H-M-N- C
↑↑ ↑ ↑
酶1 A-B-C-D E-F-G H-M-N
酶2 A-B-C D-E-F G-H-M-N
测定步骤 a. 提纯蛋白质样品 b. 测定蛋白质的分子量和氨基酸组成 c. 氨基酸末端分析（N--末端和C—末端 ）
（a）.2．4-二硝基氟苯法（FDNB ）
(b). 苯异硫氰酸法（PITC）
(c).二甲基氨基萘磺酰氯（DNS-Cl）
(d).肼解法
（e）.羧肽酶法：
2．4-二硝基氟苯法（FDNB ）Sanger 1953
苯异硫氰酸法（PITC Edman degradation）
丹磺酰氯法（DNS）
肼解法
羧肽酶法
羧肽酶 A: 除 Lys , Arg , Pro
羧肽酶B： 只水解 Arg , Lys
d. 拆开二硫键 ：（a）过甲酸氧化法 （b）还原法
e. 专一水解肽链成一系列片段（化学法和酶法）：CNBr法
甲硫氨酸形成高丝氨酸内酯
胰蛋白酶法：Lys和Arg 不与Pro相连时
胰凝乳蛋白酶：芳香族氨基酸的羧基端 ( F. Y. W )
胃蛋白酶：断裂键的两端均为疏水氨基酸( L-V)
f．分离纯化各肽段并采用Edman降解法测序
g. 用重叠法推断肽链全部氨基酸序列
h. 二硫键的定位：（对角线电泳）
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