第9章-DNA序列分析.pptVIP

Sanger第一步：加入复制终止剂 荧光检测探头 电泳，看谁跑得快 ddNTPs参与下的DNA复制 Sanger法测序产物的平均链长取决于ddNTP与dNTP的比例，比例高时，得到较短的产物； Gel Electrophoresis DNA Fragment Size Determination DNA 带负电 DNA在电泳胶中的迁移率与其片段大小有关 Sanger第二步：荧光检测 除核苷酸序列文本文件外，全自动测序仪还提供曲线图。 DNA片断序列测定的策略 测定未知序列的DNA片断 一次测序结果有长度限制（﹤1000bp) 通用引物指导未知序列的测定 引物步移 随机克隆测序 缺失克隆测序 通用引物指导未知序列的测定 根据载体序列设计通用引物测定待测DNA片断 引物步移策略 将待测DNA片断克隆在质粒载体上，利用引物步移延伸，从DNA片断的一端开始逐步进行序列测定，直至另一端为止。 克服了鸟枪法的盲目性，并省去亚克隆制备步骤，也减轻了数据分析工作量。 但由于测定下一段序列前要预先知道上游序列的碱基顺序，才能合成适当的引物进行测序。 定向缺失克隆策略、染色体步查法等。 鸟枪测序法(shotgun sequencing)：随机克隆测序 将待测的DNA片段随机打断并构建随机重叠克隆文库，然后通过通用引物测定每个克隆中的待测DNA序列。当这些