人骨髓间充质干细胞的分离培养跟鉴定文档.pdfVIP

生堡塑丝堕望!壅查!QQ!堡!Q旦笙!鲞笪!Q塑￡垫也!堕!坠!Q塑!鱼：Q!!Q堡堕2QQ鱼：yQ!!：塑Q．!Q 973 基础研究· 人骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定 王忠 高毅 汪艳 潘明新 【摘要】 目的建立一种简便可行的人骨髓问充质二F细胞(hBMSCs)的休外培养扩增方法，并就 方法应用密度梯度 hBMSCs的表型、细胞周期、生氏曲线、超微结构、核型等方而进行初步鉴定。 离心法分离hBMSCs，条件培养基培养。相差显微镜下观察hBMSCs形态学变化；流式细胞仪检测 hBMSCs的表面标记以及细胞周期：绘制hBMSCs的生长曲线，汁算细胞倍增时间：扫描电镜和透射电 镜观察hBMSCs的超微结构；Giemsa染色检测hBMSCs的细胞核型。结果密度梯度离心法能分 离出纯度较高的hBMSCs。hBMSCs贴壁生长，以长梭形为主。细胞存活率均大于95％。流式细胞仪检 达细胞比率分别为95．3％、1．8％、94．7％、0．8％、96．2％、96．6％、92．7％、96．3％、1．1％、98．7％。hBMSCs的生 长曲线呈S形，在传代7代之前具有较好的生长特性。超微结构显示hBMSCs表面较多突起，孑L隙较 多，胞质丰富，粗面内质网发达，蜒腔扩张，可见大量蛋白分泌物。核型分析显示第3、6代hBMSCs的 染色体数量和形态均未发生变化。 结论 应用密度梯度离心法可得到纯度较高的hBMSCs，能表达 hBMSCs的表型特征。hBMSCs能在体外较长期培养，细胞染色体数目未发生改变。 【关键词】人骨髓间充质干细胞；分离； 培养； 生物学鉴定 【中图分类号】R813．11【文献标识码】A 【文章编号】1671-8925(2006)010-973-005 and identificationofhumanbonemarrow stemcells Isolation，cultivationbiological mesenchymal WANG Y(m，PAN Zhong,GA0Yi，WANG Ming-xin．Dep(wtmentofCcner(_dSurgery,zhuJlmlgHospiud， SouthernMedic(d 510282，China University,Gutmgzhou Toestablisha andfeasiblemethodtocultureand human 【Abstract】Objective simple proliferate bonemarrow stem their characterizationssuch mesenchymalcells(hBMSCs)invitro，toanalyzebiological ascell and MethodshBMSCswere curve，ultrastructurecaryotype． phenotype，generationcycle，growth in culture isolated with adherenceandcultured bycombiningdensitygradientcentrifugationplastic specified were with contrast curvesofthe observations medium．Morphologi