高内涵技术新突破.PDF

实验室自动化 及细胞成像 高内涵技术的新突破 使用热休克蛋白和细胞周期进行细胞毒性预测 原著：Suk J. Hong, Richik N. Ghosh 编译：王珏 Isaac 摘要 热休克蛋白（HSPs）是所有的有机体内非常重要的一类蛋白。尤其当遭遇到各种外界压迫 时，HSP 对细胞的生理平衡和乃至生存都起到至关重要的作用，此外在信号传导、细胞增殖和 凋亡以及蛋白质动力学方面，HSP 都发挥着重要的功能。HSPs 主要有 5 大类：小 HSPs 、 Hsp60 或者伴侣、Hsp70、Hsp90 以及 Hsp110。Thermo 公司开发了一系列 Cellomics® 高内 涵筛选试剂盒，对不同的 HSPs 进行基于细胞的高内涵分析，可以用来快速准确地评估细胞的 应激反应。这些试剂盒及检测方法可以对细胞内各类 HSPs 进行荧光标记、细胞成像和定量检 测：(1) Hsp27 和 phospho-Hsp27, (2) Hsp60 和 Hsp90beta, (3) Hsp70 和 Hsp90alpha, 以及 (4) FKBP52 (Hsp59)。为了验证这些试剂盒的性能，我们使用两种具有代表性的肿瘤细 胞——A549 和 U2OS。使用不同的化合物处理这两种细胞后，经过固定染色，成像等步骤的前 期准备后，运用高内涵分析系统可以加以数据统计分析，能够快速精确地判断和评估有毒化合 物对细胞产生的刺激。这些数据都经过其他独立的毒性测试（如 BrdU cell proliferation, p38 MAPK 和 cell loss）所验证。HSPs 引起的细胞应激反应往往先于动物毒性（可通过 LD50 来确 定的），因此这些数据不仅提供了药物的细胞毒性指示，并且可能获得意料之外的各类细胞反 应。总的来说，使用基于细胞的自动化高内涵分析来监测 HSPs，是对细胞应激分析的一种行之 有效的策略。 背景介绍 热休克蛋白最主要的功能是作为分子伴侣 细胞里的线粒体特异性应激反应诱导出来。在 促进蛋白质的折叠和合成。然而，热休克蛋白的 心脏和肌肉细胞发生局部缺血性损伤后，它能 角色已经扩大到了细胞信号，细胞生存，蛋白质 够保护线粒体的功能，并抑制细胞死亡。Hsp90 降解，蛋白质寻靶和运输，以及转录因子的调控 是真核细胞中一种大量存在的蛋白，它有两种 中。热激、氧化、细胞因子、重金属、化疗试剂和 单独的异构体：a 和 b。Hsp90 和许多其它辅 激 素 等 细 胞 刺 激 都 是 通 过 HSF-1, STAT1, 助伴侣蛋白一起，表现出了伴侣蛋白的活性，在 ATF3 ，c-Jun 等细胞因子进行转录调控来提高 各种信号途径相关的特异性蛋白折叠中发挥着 细胞中热休克蛋白的表达水平，这种细胞应激 重要的作用。Hsp70 不仅能够防止蛋白聚集，帮 反应对于维持细胞的动态平衡十分重要。热休 助蛋白折叠，而且能够引导蛋白穿过细胞器官