黑素转铁蛋白在家兔网织红细胞膜上表达与其在铁摄取中.PDFVIP

DO I :10.13459/j .cnki .cj ap.2001.04.018 356 Chin J A ppl Physiol 200 1;17(4) ＊ 1 2 1 陈文芳, 钱忠明, 谢俊霞 (1., 266021;2., ) :研究黑素转铁蛋白(p97)在家兔网织红细胞膜上的表达及 在非转铁蛋白结合铁摄取中的作用。: 59 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS=PAGE)和放射性同位素法(Fe)。:①网织红细胞孵育液浓缩后, 经SDS测 定,在分子量97kD 位置上可见 一条明显的蛋白带;用磷脂酚肌醇磷脂酶 C (PI-PLC)300 mu/ml 预处理网织红细胞 后, 孵育液浓缩再经SDS测定, 在分子量97kD 处仍有 一条明显的蛋白带, 且 平均OD 值高于未经处理的网 织红细胞;而成熟的红细胞在此处却没有明显的蛋白带。②单纯用 PI-PLC 作用于网织红细胞, 铁摄取无明显变 化(P0.05)。③去除内源性转铁蛋白后, 再用PI-PLC 作用网织红细胞, 则胞浆内铁及整合到血红素中的铁均较未 经处理的网织红细胞明显降低(P0.05 )。:p97 可能存在于家兔网织红细胞膜上, 且在摄取非转铁蛋白结合 铁的过程中可能发挥作用。 :　黑素转铁蛋白;　聚丙烯酚胺凝胶电泳;　非转铁蛋白结合铁;　网织红细胞 :Q26 :A :1000-6834 (2001)04-0356-04 　　(melano ransferrin )p97, ml,0 .15 mol/L NaCl 3 , [1,2] , ,4 ℃2000 g 。p97 30 min,1/4 , 。, 78%～84.5%, PBS , -(GPI ); 11%～17 %。 p97 , , 。 GPI 。 ,, 1/4 、、、、 PBS ,11%～17 %。 p97, p97 1.3　 8 , p97 , 2×10 PI 0.5 ml 。 (pH7.4)0.5 ml PI-PLC (300 mu/ml) p97 p97 (pH 7.4),30 ℃ 30 min, 。 。2 000 g 30 min,, 0.2 p97 , μm , Cen ricon-10 7 SDS, 8 ,p97 PAGE 。2×10 0.5 ml 。 (pH7.4 ),。 7 10% 1　 (), 1.1 　 0.1%R250 30 ～40 59 Fe (FeCI )Amersham , min,40% 10% 3 518.13mCi/mmo 1;pI-PLC Sigma ; 1 ～3 h,。 Bio-Rad ; 1.4