免疫磁珠捕获法检测志贺菌的模拟研究-检验医学.PDF

检验医学２０１２年３月第２７卷第３期　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍａｒｃｈ２０１２，Ｖｏｌ２７．Ｎｏ３． ·１６７· 文章编号：１６７３８６４０（２０１２）０３０１６７０４　　　中图分类号：Ｒ３７８．２　　　文献标志码：Ａ 免疫磁珠捕获法检测志贺菌的模拟研究 盛跃颖，　陈洪友，　张　曦，　庄　源，　陈　敏 （上海市疾病预防控制中心，上海２００３３６） 　　摘要：目的　评估所制备的志贺菌免疫磁珠特异性富集作用，为建立基于免疫磁珠捕获法的志贺菌检测流程 提供技术依据。方法　制备志贺菌属细菌（鲍氏志贺菌除外）、非目标菌（大肠埃希菌、产气肠杆菌、鲍曼不动杆菌、 肺炎克雷伯菌、弗尼斯弧菌、表皮葡萄球菌）的菌悬液，利用志贺菌特异性多抗免疫磁珠进行捕获，接种平板后进行 ４ 菌落计数，并计算免疫磁珠的特异性及非特异性吸附效率。设计干扰试验，在含有１０ｃｆｕ／ｍＬ的大肠埃希菌悬液 中，加入不同浓度的目标菌，用所制备的磁珠进行捕获，评估免疫磁珠的特异性富集效率。在经３和６ｈ预增菌的 含有已知量目标菌的奶粉模拟标本及未增菌的粪便模拟标本中，分别加入所制备的磁珠进行捕获，评估基于免疫 磁珠捕获法的志贺菌检测流程的可行性。结果　菌落计数表明，制备的志贺菌免疫磁珠对痢疾志贺菌、福氏志贺 菌和宋内志贺菌的捕获效率均超过３０％，对６种非目标菌的非特异性吸附效率＜３％。干扰试验结果显示，与常规 直接平板接种法相比，免疫磁珠捕获法的敏感性提高了约１００倍；奶粉和粪便模拟试验的结果显示，免疫磁珠捕获 １ １ 法的最低检测限分别可达１０ｃｆｕ／２５ｇ和１０ｃｆｕ／ｍＬ，并对标本中目标菌的检出率有一定提高。结论　志贺菌免疫 磁珠对志贺菌属细菌（鲍氏志贺菌除外）具有一定特异捕获与富集作用，可应用于实验室的日常检测工作。 关键词：免疫磁珠；志贺菌；吸附效率 　　ＴｈｅｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓｔｕｄｙｏｆｉｍｍｕｎｏｍａｇｎｅｔｉｃｓｅｐａｒａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳｈｉｇｅｌｌａｓｐｅｃｉｅｓ　ＳＨＥＮＧ Ｙｕｅｙｉｎｇ，ＣＨＥＮＨｏｎｇｙｏｕ，ＺＨＡＮＧＸｉ，ＺＨＵＡＮＧＹｕａｎ，ＣＨＥＮＭｉｎ．　（ＳｈａｎｇｈａｉＭｕｎｉｃｉｐａｌＣｅｎｔｅｒＦｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌ ａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００３３６，Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｅｖａｌｕａｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔｒｅａｃｔｉｏｎｓｏｆｉｍｍｕｎｏｍａｇｎｅｔｉｃｂｅａｄｓｏｆＳｈｉｇｅｌｌａ，ａｎｄｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｔｅｃｈｎｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｉｍｍｕｎｏｍａｇｎｅｔｉｃｓｅｐａｒａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳｈｉｇｅｌｌａｓｐｅｃｉｅｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＰｕｒｅｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆＳｈｉｇｅｌｌａｓｐｅｃｉｅｓ（ｅｘｃｅｐｔＳｈｉｇｅｌｌａｂｏｙｄｉｉ）ａｎｄｎｏｎｔａｒｇｅｔｂａｃｔｅｒｉａ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ， Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ，Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｂａｕｍａｎｎｉｉ，Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，ＶｉｂｒｉｏｆｌｕｖｉａｌｉｓａｎｄＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ） ｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｃａｌｃｕｌａｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｄｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃｃａｐｔｕｒｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓｏｆｔｈｅｉｍｍｕｎｏｍａｇｎｅｔｉｃｂｅａｄｓｂｙｃｏｕｎｔｉｎｇｔｈｅｃｏｌｏｎｙ． Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｄｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔｒｅａｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｍｍｕｎｏｍａｇｎｅｔｉｃｂｅａｄｓ，ｗｈｉｃｈ