第二章节植物细胞工程.pptVIP

植物细胞工程 发展历史 19世纪30年代Schwann 和Schleidn创立细胞学说，认为植物和动物都是由细胞构成。 1943年，美科学家White正式提出植物细胞具有全能性的学说，认为每个植物细胞具有该植物的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 1934年，荷兰植物学家Went等发现了生长素，随后又发现了其它生长素。 1948年，斯科克等较好地解决了如何从离体组织或器官中诱导植物再生的问题，并确定了腺嘌呤/生长素的比例是控制芽和根形成的一个重要条件。 1953年，Muir开创了建立单细胞无性繁殖的工作。 1956年，Miller发现了激动素 1958年，Steward等从胡萝卜根韧皮部愈伤组织获得单细胞，并经诱导形成胚状体再生了植株，这是世界上首次通过实验证实了植物细胞具有全能性。 20世纪六十年代中后期，植物组织培养进入大规模的应用阶段。1960年Morel采用兰属的茎尖培养，实现了去病毒和快速繁殖两个目的；1975年Rosati从草莓花药培养中获得了小孢子发育的植株。 罗宗洛和李继侗是远东植物培养的先驱。 组织培养技术是我国农业高新技术中最重要、最活跃的领域之一，被誉为第四次绿色革命。 植物组织与器官培养 植物组织培养是指在无菌条下，将离体的植物器官（如根尖、茎尖、叶、花、未成熟的果实、种子等）、组织（如花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞、生殖细胞等）、胚胎（如成熟和未成熟的胚）、原生质体等培养在人工配置的培养基上，给予适当的培养条件，诱发产生愈伤组织、潜伏芽，或者长成新的完整的植株的一种实验技术。特点：条件要求比较苛刻，整个培养过程需在无菌条件下进行，营养成分及激素浓度适当。 全能细胞 能够表达生物体基因组的任何一种基因，并能够分化出该生物体内任何一种类型的细胞，进而发育为一个完全相同的生物体。 愈伤组织 外植体组织增生的细胞产生的一团不定型的疏散排列的薄壁细胞。这些细胞的大小、形状、液泡化程度、胞质含量、细胞壁特性等通常具有很大的差异。愈伤组织细胞是分化的，但还没有形成组织上的结构，因此愈伤组织培养过程中没有明显的组织或器官上的分化。 愈伤组织可以用继代培养的方式长期保存，也可以通过悬浮培养而迅速增殖用作无性系；也可以用作原生质体培养时原生质体的来源。 外植体 植物组织培养时用来进行离体无菌培养的离体材料，可以是器官、组织、细胞和原生质体。 继代培养 愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上。这种转移称为继代培养或传代培养。 细胞分化或形态建成 多数情况下植物细胞或组织培养是希望得到再生植株，一般植物通过细胞或组织培养达到再生目的要经过以下两个步骤： 1）培养的植物细胞或组织的脱分化，形成愈伤组织。 2）有新形成的愈伤组织形成一些分生细胞团，随后由其分化成不同的器官原基。 植物组织培养的基本步骤 组织培养可分为植株、器官、组织培养。 根据操作方式的不同可分为固体培养和液体培养。液体培养又可以分为振荡培养、旋转培养和静止培养。 培养材料的采集 （一）培养材料的采集 植物具有全能性的细胞有三类： 1）受精卵 2）雌雄配子体及单倍体细胞 3）发育中的分生组织细胞 （二）培养材料的消毒 先将材料用自来水冲洗干净，最后一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小快。 在无菌环境中将材料放入70%的酒精中浸泡30-60 s。 再将材料移入漂白粉饱和液或0.01%升汞(HgCl2)中消毒10 min。 取出后用无菌水冲洗三四次。 制备外植体 在无菌的环境下，将已消毒的材料用无菌刀、煎、镊子等剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮或种皮胚乳（叶片则不需剥皮），然后切成0.2-0.5 cm厚的小片。在操作中严禁用手触摸材料。 接种和培养 接种：在无菌环境下，将切好的外植体立即接种在培养基上，每瓶接种4-10个。 封口：接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿用无菌胶带封口。 温度：培养基大多应保持在25度左右，但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待。 增殖：在新梢等形成后需继代培养。把材料分株或切段转入增殖培养基中（增殖培养基一般在分化培养基上加以改良），增殖1个月左右后，可视情况进行再殖。 （五） 根的诱导 继代培养形成的不定芽和侧芽一般没有根，必须转到生根培养基上进行生根培养。一个月后即可获得健壮根系。 （六）组培苗的移苗移载 试管苗进入自然环境前必须进行炼苗。一般先将培养容器打开，于室内自然光照下放三天，然后取出小苗，用自来水把根系上的营养基冲洗干净，再栽入已准备好的基质中（基质使用前最好消毒）。移栽前要适当遮荫，加强水分管理，保持较高的湿度，但要防止乱苗。 愈伤组织培养的基本过程 （一）愈伤组织的形成 （