徐淮山羊Oct4启动子功能的初步分析-遗传.PDF

Hereditas (Beijing) 2014 年8 月, 36(8): 793 ―799 研究报告 徐淮山羊Oct4 启动子功能的初步分析 韦光辉, 李东, 左其生, 张亚妮, 朱睿, 张蕾, 刘志永, 邱峰龙, 李碧春 扬州大学动物科学与技术学院, 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室, 扬州 225009 摘要:为确定徐淮山羊 Oct4(Octamer-binding transcription factor 4)基因启动子活性区域, 并初步探讨 TSA (Trichostatin A)和VPA(Valproic acid)对Oct4 基因启动子活性的调控作用, 文章采用Primer5.0 设计包含Oct4 基 因启动子不同长度片段的特异性PCR 引物, 扩增并定向克隆至PGL3-Bacic 荧光素酶报告载体, 分别转染gEF 、 P19 和COS7 细胞, 通过TSA 和VPA 诱导, 进行双荧光报告基因活性检测。同时用 Oct4 启动子– 1516~+30 bp 片段替换pEGFP-N1 中的CMV 启动子, 通过GFP 荧光表达检测Oct4 启动子的活性。结果表明：在gEF 、P19 和COS7 细胞中Oct4 启动子各片段均表现出不同程度的活性, 且最强活性区域为上游– 1516~+30 bp, 基本活性 区域为–238~+30 bp ; 在– 1516~–946 bp 、–615~–96 bp 区域存在正调控元件, 在– 1936~– 1516 bp 、–946~–615 bp 区域存在负调控元件; 终浓度为 1 μmol/L 的TSA 和4 mmol/L 的VPA 为诱导的最佳浓度, 均能显著增强Oct4 基因启动子的活性; – 1516~+30 bp 片段能够启动GFP 的表达。研究结果为揭示Oct4 基因的转录调控机制奠定 了基础。 Oct4; 启动子活性; TSA; VPA; 诱导 关键词: Functional analysis of Oct4 promoter in Xuhuai goat Guanghui Wei, Dong Li, Qisheng Zuo, Yani Zhang, Rui Zhu, Lei Zhang, Zhiyong Liu, Fenglong Qiu, Bichun Li Key Laboratory of Animal Breeding Reproduction and Molecular Design for Jiangsu Province , College of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China Abstract: The aim of this study was to determine the activity region of Oct4 (octamer-binding transcription factor 4) promoterin Xuhuai goat, and to investigate the effect of TSA (trichostatin A) and VPA(valproicacid) on Oct4 promoter ac- tivity. Specific PCR primers of Oct4 promoter including different lengths of fragments were designed by Primer 5.0, then were amplified and cloned into PGL3-Bacic luciferase reporter vector. All the recon