人白介素4(I-4)ELISA试剂盒说明书.docVIP

人白介素4 (IL-4)酶联免疫分析 试剂盒说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：1.6 ng/ml - 100 ng/ml 最低检测限：0.4 ng/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人IL-4，且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期：6个月 预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-4含量。 说明： 试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 概述： 白细胞介素-4（白介素-4，Interleukin-4，IL-4）是II型辅助T细胞（Th2细胞）分泌的细胞因子。白细胞介素-4的生物作用，包括刺激活化B细胞和T细胞增殖、 CD4+T细胞分化成II型辅助T细胞。它也在调节体液免疫和适应性免疫中起关键作用。白细胞介素-4诱导B细胞抗体类别转换向IgE，上调第二型主要组织兼容性复合体的产生。它最初被认为是B淋巴细胞分化因子(BCDF)，同时也是B淋巴细胞刺激因子(BSF1)。随着后来人和鼠IL-4被分子化克隆及表达，发现了IL-4的多种功能作用于B淋巴细胞及其他造血及非造血细胞，包括T淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞，肥大细胞、骨系及红细胞系祖细胞，纤维母细胞及内皮细胞等。IL-4在体外及体内均呈现出抗肿瘤效应。 实验原理： 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗IL-4抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IL-4抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-4呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制： 酶联板(Assay plate )： 一块（96孔）。 标准品（Standard）： 2瓶(冻干品)。 样品稀释液(Sample Diluent)： 1×20ml/瓶。 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）： 1×10ml/瓶。 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）： 1×10ml/瓶。 生物素标记抗体（Biotin-antibody）： 1×120μl/瓶（1：100）。 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）： 1×120μl/瓶（1：100）。 底物溶液（TMB Substrate）： 1×10ml/瓶。 浓洗涤液（Wash Buffer）： 1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 终止液（Stop Solution）： 1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材： 标准规格酶标仪 高速离心机 电热恒温培养箱 干净的试管和Eppendof管 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存： 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 标本的稀释原则： 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 标准品的稀释原则： 2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释100 ng/ml, 50 ng/ml, 25 ng/ml, 12.5 ng/ml 6.