具杀线虫活性植物内生细菌和根际放线菌的筛选及防效研究-生物学;微生物学专业毕业论文.docxVIP

ABSTRACT ABSTRACT ．Ⅲ 第一章综述 ．．．．．】【 1、植物寄生性线虫病的研究概况 一 ．1 1．1植物寄生性线虫的生物学特性 1 1．1．1植物寄生线虫的形态 l 1．1．2侵染特性 1 1．1．3植物寄生线虫的传播 2 1．1．4植物寄生性线虫的生活史 2 1．2植物寄生性线虫的危害 。2 1．2．1根结线虫和胞囊线虫的危害 。2 1．2．2松材线虫的危害 3 1．3植物寄生性线虫的防治途径 一 ．．．．———— 4 1．3．1化学防j治 4 1．3．2农业措施防治 4 1．3．3生物防治 5 2细菌对植物寄生线虫的生物防治研究进展 。5 2．1植物寄生线虫生防细菌的种类 厶 ．5 2．1．1根际细菌 。5 2．1．2内生细菌 6 2．1．3线虫专性寄生细菌 。7 2．2生防细菌对植物寄生线虫的作用机理 ．．． 7 2．2．1产生杀线虫物质 7 2．2．2改变根系分泌物 8 乞Z 3营养空间位点的竞争 ．．． ．8 2．2．4诱导植物系统抗性 。‘ ．．． 8 3’杀线虫放线菌的研究进展 。9 3：1杀线虫放线菌的来源 9 龟1．陆生放线菌 ．： - ．．9 3．I．2海洋放线菌‰ 10 3．2杀线虫放线菌的作用机理 ．11 0‘实验设计 ．．- 11 第二章具杀线虫作用植物内生细菌和根际放线菌的筛选 ． 13 1材料与方法 k ～ 。1．3 E 1材料 ．j 。13 k ZI．1实验材料 13 1j 1．2培养基 ¨13 L 1，3实验仪器和试剂 14 1．2实验方法 ．14 i 1．2．1测试线虫及其培养和分离方法 1．2．1测试线虫及其培养和分离方法 。 14 1．2．2放线菌的分离、纯化和保存 ．14 1：2．3具杀线虫活性放线菌的筛选 ．14 1．2．4植物内生细菌的分离和定殖测定 ．15 1．2．5具杀线虫活性植物内生细菌的筛选 ．．． ．15 1．2．6具杀线虫活性放线菌和植物内生细菌的复筛 。 。15 1．2．7统计分析 。1 5 2结果与分析 ．．． 。15 2．1具杀线虫活性放线菌的初步筛选结果 ．16 2．2具杀线虫活性的植物内生细菌的筛选结果 16 2．3高活性放线菌的复筛 ．17 2．4高活性植物内生细菌的复筛结果 18 3小结与讨论 。 19 第三章具杀线虫活性植物内生细菌的鉴定 ． 21 1材料与方法 ．2l 1．1供试材料 ．2l 1．1．1菌株 21 1．1．2引物合成 ： 21 1．1．3实验仪器和试剂 。2 l 1．2实验方法 。2l 1．．2．1菌株的培养、形态特征和生理生化特征 21 1．2．2菌株1 6SrDNA的扩增和序列分析 ．．22 1．2．2．1菌株1 6SrDNA的PCR扩增 。22 1．2．2．2扩增后PCR产物的割胶回收纯化 22 1．2．2．3测序 ．22 1．2．3系统发育与分析 22 2结果与分析 22 2．1具杀线虫活性内生细菌的培养、形态特征和生理生化特征 ．22 2．1．1菌株培养、形态特征 ．22 2．1．2菌株生理生化特征．．． j 。23 2．2具杀线虫活性内生细菌1 6SrDNA序列的PCR扩增结果 ．．． ．25 2．3‘具杀线虫活性内生细菌16SrDNA序列 ．26 2：4具杀线虫活性内生细菌1 6SrDNA序列相似性比较与系统发育树 29 3小结与讨论。 ．岫 ¨ 。．30 第四章根际放线菌和植物内生细菌的杀线虫产物性质研究 31 第一节放线菌的杀线虫物质的性质研究 。 3l t材料与方法 ～ 。3 l 1．t材料 ．3 1 1．1．1实验材料 3 l 1：1．2培养基～ 。。 k 。3 1 1．1．3实验仪器和试剂 31 1．2实验方法 。32 1。2．1菌株发酵液的获得 32 ．1．2．2杀线虫实验影响因素的排除 ．1．2．2杀线虫实验影响因素的排除 。32 1．2．3杀线虫物质的热稳定性测定 。．32 1．2．4杀线虫物质的浓缩 ．32 1．2．5放线菌产生的小分子挥发性物质的探索 。32 2结果与分析 。32 2．1菌体在作用的排除 。32 2．2放线菌杀线虫物质的热稳定性测定 33 2．3放线菌杀线虫物质的浓缩 ： 33 2．4放线菌产生的小分子挥发性物质的探索 。 ．．34 3．小结与讨论 。 ．34 第二节植物内生细菌的杀线虫物质的性质研究 36 1材料与方法 36 1．1材料 。： ．．36 1．1．1实验材料 ．36 1．1．2培养基 二 36 1．1．3实验仪器和试剂 36 1．2实验方法 ．37 1．2．1内生细菌杀线虫代谢产物稳定性的初步测定 37 1．2．2硫酸铵分级沉淀法提取杀线虫物质 38 1．2．3 SDS法检测杀线虫物质的性质 ．．38 2结果与分析 ．39 2