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* * 第三章 细胞生物学研究方法 第一节 细胞形态结构的观察方法 一、光学显微镜技术 显微镜和显微镜的分辨能力 肉眼:0.2 mm; 光镜:0.2 um; 电镜:0.2 nm 0.61 λ 分辨率 D N . sin α / 2 = λ: 光源波长; α: 物镜镜口角; N: 介质折射率 显微镜成像原理 普通复式光学显微镜 (light microscope) 相差显微镜 (phase-contrast microscope) (光程差或相位差转变为振幅差,相差板) 荧光显微镜 (fluorescence microscope) 微分干涉显微镜 (differential-interference microscope) (厚度差转变为明暗差;增加样品反差,立体感强) 激光共聚焦显微镜 (laser scanning confocal microscope) 双目显微镜 正置显微镜 倒置显微镜 荧光显微镜及其照片 共聚焦显微镜及其显微图像 激光共聚焦原理 暗视野成像原理 二、电子显微镜 1,电镜基本知识和结构(波长小于0.1nm) 2,样品制备 (超薄切片,负染色,冰冻蚀刻,三维重构,扫描) 3,电镜种类 扫描电子显微镜 透射电子显微镜 扫描隧道显微镜 透射电镜及其图像 扫描电镜及其图像 第二节 细胞组分的分析方法 一、高速、超速和梯度密度离心分离各种细胞器、生物大分子及其复合物 差速离心 密度梯度离心 二、细胞内核酸、蛋白质、酶、糖类、脂类的显色 DNA:福尔根(Feulgen)反应--紫红色 多糖类:PAS反应--黄色 脂肪:苏丹III--红色 蛋白质:米伦(Millon)--红色 三、特异抗体技术 免疫荧光 免疫电镜 免疫沉淀 Western blotting 四、特异核酸标记技术 In situ hybridization Northern blot (RNA); Southern blot (DNA) 原位杂交技术 五、放射性标记技术 六、定量细胞化学技术 七、柱层析、分子筛、免疫吸附、免疫沉淀等方法分离蛋白质组分及复合物(交链和变性) 定性、定位、半定量研究(标记,自显影) 32P(14天), 14C(5760年), 3H(12年), 35S(87天), 131I (8) 显微分光光度术 (紫外显微分光光度、可见光显微分光光度染色) 流式细胞仪 流式细胞术 *
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