第06章 临床生物化学检验的方法与试剂盒.pptVIP

1.决定性方法 （definitive method）　指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法。 2.参考方法 （reference method）　指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。 3.常规方法 （routine method）　指性能指标符合临床或其他目的的需要，有足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析范围，而且经济实用。 参考物质包括校准物质(calibration material，calibrator，校准物)和正确性质控物质(trueness control material)。 校准物是指在校准函数中其值被用作自变量的参考物质，用于对测量系统校准或对材料赋值。 正确性质控物质在国内多称为质控物、质控品、控制物，是用于评价一种测量系统的测量偏差的参考物质。 　根据ISO，较高级别的参考物质分成以下两级： 1．一级标准品（原级参考物） 是一种稳定而均一的物质，它的数值已由决定性方法确定，或由高度准确的若干方法确定，所含杂质也已经定量，属于有证参考物质(certified reference material，CRM)，附有证书。 1.实用性 一般应具备微量快速，便于急诊；费用低廉；应用安全。 2.可靠性 一般具有较高的精密度和准确度，以及较大的检测范围。精密度即变异系数（CV）一般应小于5%。准确度是指测定值与“真值”的符合程度，一般偏差系数应小于5%。 1.确定性能目标 根据建立方法的目的，在建立方法之前，设计可以接受的性能目标，包括不精密度、不准确度、线性范围。方法的性能目标是方法建立的基础，也是判断建立方法是否成功的标准。 2.选择反应原理 临床生物化学检验方法按其传统分类可分为光谱法、层析法、电泳法、酶法、电化学法、分子生物学和免疫化学法等，这些方法的建立首先要根据其技术的原理和被测物质的物理化学性质来确定。其中大部分是紫外－可见分光光度法，遵守郎伯－比耳定律。 2.选择反应条件 （1）选择合适的测定波长 一般选择产物或底物的最大吸收波长作为测定波长，以可获得最大灵敏度。 （2）反应体系的pH 对于酶促反应，反应体系的pH一般应是酶促反应的最适pH，同时应兼顾酶、底物和产物的稳定性。 重复性试验的目的是测定候选方法的随机误差。 指标是变异系数CV、标准差， CV越小，精密度越好，反之则差，故称其为不精密度。 全国临床检验操作规程（第三版）给出了美国国会1988年临床实验室修正案（clinical laboratory improvement amendment，CLIA′88）推荐的常规化学分析项目的允许误差（EA）（表6-1） 一般情况下， EA是CLIA′88推荐的可接受性能的1/4，不同的医学决定水平（Xc）有不同的EA 表6-1　 CLIA′88推荐的允许误差(部分) 1.96s ≤EA，可以初步接受，进一步判断见后述的方法性能判断。 其依据是95 %的随机误差值为1.96 s 。 1.评价前准备 ①对于评价对象和评价方案均应熟悉。 ②试验用试剂应是同批次配制，或同一批号的商品试剂盒和参考物，仪器也应处于良好的工作状态。 1.评价前准备 ③试验用样品一般选择2个（亦可更多），一个在参考范围或在医学决定水平附近，另一个为异常值，被测物在疾病时增高者用高值，降低者用低值；试验样品的介质应与临床样品一致，并应妥善保存，应保证在整个试验过程中稳定。 ④先作一个初步的批内精密度测定，如果批内精密度不符合生产厂家规定的质量标准，则联系厂家对仪器进行修理或保养，直到批内精密度符合生产厂家规定的质量标准才能进行下面的试验。 批内精密度计算公式如下（教材式6-1）： 　 CV批内（%）= 　　　　　　 2.评价步骤 2.评价步骤 用2个样品每天测定2批，批间测定间隔不得少于2h，每批测定均作2份，至少共测定20天。 每批测定至少做一个质控。 原始实验数据整理表 中间计算结果表 2. 统计计算 首先计算参数A、B和Sr，然后计算批内、批间、天间和总变异系数。 1．比较前准备 ①试验者应熟悉所用的仪器、试验方法、比较方法和评价方案。 ②试验样品应收集新鲜的正常和异常的临床样品，应有足够宽的浓度范围，各浓度应有合适的比例。如不能及时测定，样品应妥善保存并应在分析物的稳定期内测定。 2．评价步骤 ①样品数至少为40个，每个样品用2种方法分别作双份测定，因此样品应有足够的量，如临床样品的量太少可将2份含量相近的样品混合。 ②每天测定8个样品，双份测定