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同型半胱氨酸的检测及临床应用 前 言 同型半胱氨酸（homocysteine, Hcy）是一种人体内的含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的重要中间产物。 新热点:许多学者认为血液Hcy升高已成为动脉粥样硬化发生的一个独立危险因子，也成为基础医学和临床医学研究的新热点。 新理念:伴有血浆Hcy升高(10umol/L)的原发性高血压定义为H型高血压。 同型半胱氨酸（Hcy）能够让四分之三的高血压患者脑卒中死亡风险增加12倍。 一、Hcy的存在形式 有研究发现在正常人和高Hcy血症患者血浆中，Hcy大部分（70％）是与蛋白质结合，血浆中与Hcy结合的是白蛋白。 Hcy在血液中的存在方式: 部分以同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化物存在，微量以还原型同型半胱氨酸存在，大部分通过二硫键与白蛋白结合而存在。 二、影响血液Hcy水平的因素 1、遗传因素：? ①C667T点突变可引起Hcy升高。 ②CBS基因多态性。 ③蛋氨酸合成酶基因多态性。 2、性别与年龄： 国内外不少研究发现，Hcy随年龄增长而升高，而且男性女性。女性在绝经前的水平较低，绝经后显著升高，认为其机制可能与雌激素水平的变化有关。 3、营养因素： ? ①VitB6、VitB12、叶酸是Hcy代谢辅酶，它们的水平与Hcy水平呈负相关，摄入不足时，上述三个酶活性下降，则Hcy升高。 ②饮酒：长期饮酒可引起肝细胞蛋氨酸合成酶活性下降，从而造成Hcy血症。 ③饮食中蛋氨酸含量过高：有报道认为高动物蛋白、低植物蛋白饮食可能是Hcy血症的危险因素之一。 三、同型半胱氨酸致病机理 1、内皮毒性作用： Hcy可引起内皮细胞损伤，尤其合并高血压时更易受损，并且破坏血管壁弹力层和胶原纤维。 2、刺激血管平滑肌细胞增生： Hcy可直接诱导血管平滑肌细胞增殖。 3、致血栓作用： Hcy可促进血栓调节因子的表达，激活蛋白C和凝血因子Ⅻ、Ⅴ，血小板内前列腺素合成增加，从而促进血小板粘附和聚集。 4、脂肪、糖、蛋白代谢紊乱：　 Hcy可促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，还可改变动脉壁糖蛋白分子纤维化结构，促进斑块钙化。 5、干扰谷胱甘肽的合成 ： 谷胱甘肽是一种重要的高氧化剂，它能防止很多细胞成分的氧化互相作用，对血管产生保护作用。Hcy干扰谷胱甘肽的合成，从而对机体造成危害 。 6、影响体内的转甲基化反应 ： Hcy浓度的升高会影响体内许多物质的甲基化过程，如核酸（DNA和RNA）、蛋白质、髓磷脂、多糖、胆碱和儿茶酚胺类的甲基化；甲基化能力的降低影响细胞的发育及分化，这可能是Hcy致病的关键因素。 四、Hcy的测定方法 同位素法：该方法灵敏度高，特异性强，但操作繁琐且有放射污染，未能推广使用。 色谱法：灵敏度、特异性好，但仪器价格昂贵而不能推广。 荧光偏振免疫测定：此法需要专门的荧光偏光免疫检测仪。 ELISA：对仪器要求不高，易普及，但结果准确性相对较差。 放射免疫法：结果准确，但有放射性污染，很少使用。 循环酶法：快速、简便、灵敏度高。可上全自动生化分析仪，适用大批标本，临床应用广泛。 Hcy循环酶法实验参数的设计 实验参数根据分析仪的不同有所差异，可要求试剂供应商提供相应的实验参数。 下面列举OLYMPUS系列的实验参数： Sample Volume（样品体积）： 9ul R1 Volume （试剂1体积）：167ul R2 Volume （试剂2体积）： 45ul Measure Wave1（主波长） ：340nm Measure Wave2（副波长） ：700nm METHOD （反应类型） ： END Method Point（反应点）： 20~27 Reagent OD Limit（吸光度范围）：-2.0~2.5 Dynamic Range (反应范围)： 3~50 Calibration Type （定标数）： 1点 Unit （单位）： umol/L 五、同型半胱氨酸的临床应用 1、心血管病防治 （1）HCY升高与动脉粥样硬化(AS)的关系： 1969年就曾有人从尸检中发现2例血浆Hcy浓度超过正常人几十倍的病儿存在广泛的动脉粥样硬化和动脉血栓。临床上发现高胱氨酸尿症病人早年多因全身动脉粥样硬化和血栓形成死于脑梗塞和心肌梗塞，这与血中Hcy升高有关。 有学者在动物实验中观察到注射Hcy后引起高Hcy血症，2—3个月后发生动脉粥样硬化 。认为高Hcy血症是发生动脉粥样硬化的独立危险因素。 （3）Hc