高速逆流色谱联用一.PPT

高速逆流色谱溶剂体系筛选及其联用技术 　　　　　　 　　　　　　　　　　　上海同田生物技术有限公司 报告内容 一、溶剂体系筛选方法 二、高速逆流色谱联用 一、溶剂体系筛选方法 HSCCC分离条件 基本原则: 不造成样品分解或变性 对样品有较大溶解度 固定相在分离柱中有较好保留 样品在两相溶剂系统中有合适的分配系数 溶剂体系的筛选方法　 1. 分配系数（ K ）法 K ＝ Cs/Cm Cs为溶质在固定相中的质量浓度 Cm为溶质在流动相中的质量浓度 Cs和Cm的比值可通过HPLC测得 理想的分配比值 k = 0.5~2，允许0.2~5 Cs Cm 　 芦荟提取物的HPLC图谱 实例（HPLC法测K值） 芦荟未知物 芦荟苷A 芦荟苷B － 上层 － 下层 体系 氯仿/异丁醇/甲醇/水（4/0.25/3/2） 目标物质 芦荟未知物 芦荟苷A 芦荟苷B 分配系数K 0.9 1.9 2.3 HSCCC保留时间 2.3 h 4.0 h 5.3 h 芦荟未知物 芦荟苷B 芦荟苷A 芦荟提取物的HSCCC图谱 芦荟苷B 芦荟苷A 芦荟未知物 　 2. 经验法 　 疏水性（石油醚体系，正已烷体系） 中等疏水性（氯仿体系，甲基叔丁基醚体系） 亲水性（正丁醇体系，乙酸乙酯体系） 　 3. 分析型HSCCC法 优点： 时间短 消耗少 节省样品 确定的体系可直接用于 放大制备，重现性佳 正己烷/乙酸乙酯/乙醇/水1：1：1.2：0.8 1：1.2：1.2：0.8 正己烷/乙酸乙酯/乙醇/水0.8：1.2：1.2：1.2 0.8：1.2：1.2：1.5 正己烷/乙酸乙酯/乙醇/水（0.8：1.2：1.2：1.7） 槲皮素 　 山萘酚 　 异鼠李素 　 二、高速逆流色谱联用技术 TBE-300A+?KTAPrime TBE-300A主机接口 1. HSCCC与?KTA系列中压系统的联用 2. HSCCC与ELSD的联用技术 优势： HSCCC-ELSD联用技术已成功用于脂肪酸，生物碱，皂苷类，萜类，甾体类等的分离 3. HSCCC-ESI-MS联用技术 适用范围广和灵敏度高等特点的分析方法 适用于分析非挥发性或热不稳定性物质 成功地用于同时在线分离和分析丹参酮ПA，EGCG，三萜酸，多肽，多酚类和黄酮类等 HSCCC-ESI-MS HSCCC能够获得高的溶质-溶剂比的流出物，从而使流动相吸收红外光谱的问题得到缓解 可以在分离的同时获得被分离物的结构信息 成功地对苯酚、硝基苯酚以及乙酰苯酚等进行了分离与鉴定，在线记录相应的IR光谱 4. HSCCC-FT-IR联用技术 小结： 随着HSCCC的普及，HSCCC与多种其他技术联用，为HSCCC的应用扩展了更大的空间。 地址：上海市张江高科技园区爱迪生路326号 邮编：201203 Tel: 021 Fax: 021 E-mail: tauto@ How to Contact Us: 对已知化合物类别的物质可参考相关文献，在文献提供的体系的基础上进行调整 对未知样品，可采用氯仿-甲醇-水=10-3-7或正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水=1-1-1-1两个极性分布范围较广的体系先进行尝试，也可以根据样品的极性选择相对应的溶剂体系，再根据目标组分的分配系数进行调整 * 小结： 溶剂体系的选择是HSCCC分离中最关键也是难度最大的一个环节，一般从样品的溶解度，通过参考文献及常用体系, 测定K值等来筛选溶剂体系，然后再通过上述提到的各种方法进行调整。 随着逆流色谱技术的普及，越来越多的人致力于体系筛选的研究工作。 * 可直接用于复杂样品中有关成分的鉴别和测定 不需要对流出液做任何分离就可用于鉴定，降低了分离过程对样品造成污染的可能性 * 对已知化合物类别的物质可参考相关文献，在文献提供的体系的基础上进行调整 对未知样品，可采用氯仿-甲醇-水=10-3-7或正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水=1-1-1-1两个极性分布范围较广的体系先进行尝试，也可以根据样品的极性选择相对应的溶剂体系，再根据目标组分的分配系数进行调整 * 小结： 溶剂体系的选择是HSCCC分离中最关键也是难度最大的一个环节，一般从样品的溶解度，通过参考文献及常用体系, 测定K值等来筛选溶剂体系，然后再通过上述提到的各种方