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间 接 免 疫 荧 光 -----检测人外周血单个核细胞 ;原 理 ; 外周血单个核细胞分离
------ 葡蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法
[原理]
外周血单个核细胞（PBMC）包括淋巴细胞、单核细胞，其体积、形状和比重与其他细胞不同。红细胞和多核细胞比重较大，为1.092左右，而淋巴细胞和单核细胞比重为1.075左右。利用比重为1.077左右的分层液作密度梯度离心，使一定比重的细胞按密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。; [材料]
1、淋巴细胞分层液（葡蔗糖-泛影葡胺，比重为1.077±0.001g/L）
2、 2％台盼蓝染液
3、 Hank’s液或者RPMI-1640培养基
4、试管、吸管、水平离心机等;[方法]
1、无菌采集静脉血2ml注入盛有2ml Hank’s液（含100u/ml肝素）的试管中，混匀。
2、吸取淋巴细胞分层液2ml加入离心管中，再将稀释抗凝血液小心沿管壁加至分层液上，应注意保持两者界面清晰。（关键）
3、室温2000r／min离心20min。管内可分为四层。;4、用毛细吸管轻轻吸出乳白色的单个核细胞，加入另一支已含有2-5mlHank’s液的离心管中，混匀。
5、室温下，1500rpm离心10min。;6、弃上清，重复洗涤一次。
用完全RPMI-1640 1ml定容，计数细胞，调整细胞浓度。
一般每ml血可分离出1-2×106个单个核细胞。
7、细胞活力检查
取1滴细胞悬液加1滴2%台盼蓝染液，作湿片高倍镜检，计算活细胞百分率。活细胞不着色，死细胞染成蓝色。一般活性应在95％以上。;材 料;方 法;;结 果;INSERT THE TITLE
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