项目名称-妊娠建立和维持的分子机制研究-首席科学家-王海滨中国-.docVIP

项目名称： 妊娠建立和维持的分子机制研究 首席科学家： 王海滨 中国科学院动物研究所 起止年限： 2011.1至2015.8 依托部门： 国家人口和计划生育委员会 中国科学院  二、预期目标 总体目标 本项目的总体目标是通过系统研究胚胎激活、子宫接受性建立、蜕膜化、胎盘发育等关键事件的调控机制，使我们能更全面、深入地了解妊娠发生与发展进程中母-胎微环境的动态变化规律和分子基础，进一步加深对自发流产和先兆子痫等妊娠疾病发生机制的认识，以期为不孕不育和妊娠疾病的诊治提供理论基础和新思路。此外，项目的实施与完成也将培养一批能够独立从事高水平科学研究的后备力量，造就一支具有国际竞争力的优秀创新团队，促进我国生殖健康领域的研究。 五年预期目标 研究团队本着“资源共享、共同发展”的原则，通过本项目的实施，力争达到以下目标： 在分子、细胞至组织与系统水平，更深入地了解妊娠发生与发展进程中母-胎微环境的动态变化规律和分子基础，进一步加深对自发流产和先兆子痫等妊娠疾病发生机制的认识： 揭示囊胚获得着床能力的分子基础，阐明2-4个胚源信号分子对围着床期子宫功能的调节机制。 挖掘并鉴定出2-4种子宫接受性的标志分子和蜕膜发育的关键调控分子，揭示4-6种趋化因子和关键基因在妊娠识别中的作用机制。 阐明4-6个包括胎盘源性的内分泌因子和信号通路分子在胎盘发育、滋养层细胞分化和妊娠维持中的重要作用。 建立自发流产和先兆子痫患者DNA甲基化和miRNA表达谱，建立1-2种自发流产和先兆子痫的动物模型，阐明4-6种特异基因/miRNA通过影响胚胎着床和胎盘发生关键环节引发病理性变化的作用机制。 预期在国际生命科学领域有重要影响的刊物上发表论文60-80篇，其中5.0IF10.0的论文20-30篇，IF10的论文4-8篇；申请发明专利4-8项。 预期培养博士研究生60-80名、硕士研究生15-20名、博士后研究人员10-20名，通过项目带动和人才引进，在全国造就一支胚胎着床与胎盘发育领域高水平的科研队伍，进一步强化发育与生殖重大研究计划北京基地的建设。 进一步提升我国在胚胎着床、胎盘发育以及相关疾病领域的研究水平和国际学术地位。  三、研究方案 总体思路及课题间的相互关系 本项目以“科学问题和国家需求引领学科发展”为指导思想，以“胚胎着床决定妊娠结局”为课题主线，从发育时程和生理、病理两个层面上，集合国内优势力量组建科研团队，研究胚胎与母体相互作用决定妊娠结局的分子机制。项目的总体思路和课题间的相互关系见图1。我们拟根据国家重大需求和本学科未来发展的趋势，结合现有工作基础，重点研究3个关键科学问题，并将其分解为5个方面的研究内容，利用多种转基因、组织特异性基因敲除小鼠动物模型和人类临床资源，采用高通量组学研究策略以及生物化学、细胞生物学、分子生物学、分子免疫学、遗传学、表观遗传学和生物信息学等相结合的手段，系统开展胚胎激活、子宫接受性建立、蜕膜化、胎盘发育、自发流产和先兆子痫等妊娠疾病发生机制的研究。图1：项目总体学术思路。 图1：项目总体学术思路。 。 技术路线 妊娠建立和维持是一个在特定发育时相内涉及一系列复杂的细胞和分子水平相互作用的生理过程。研究其发生发展的调控机制必须从整体和在体出发，既要强调由激素主导的机体大环境的稳态，又要深入细胞与分子水平研究众多动态变化的信号分子所交织的母-胎互作微环境，基于我们已经建立的研究手段和前期工作基础，我们拟在3个技术层面，集成各种新技术和新模型，开展多学科交叉的功能与机制研究（图2）。具体技术途径如下： 图 图2：项目总体技术路线示意图。 分子水平的技术途径：应用RNA Seq、基因芯片、焦磷酸测序、Northern blot、原位杂交、qRT-PCR、miRNA测序、ChIP、ChIP-Seq、酵母双杂交、非标记定量蛋白质组学技术、双向电泳、蛋白印记、免疫荧光和Co-IP等技术研究基因/ miRNA/蛋白质在相应细胞和组织中的转录表达、定位、相互作用、调控及功能。 细胞水平的技术途径：综合利用已经建立的滋养层干细胞、原代和永生化的滋养层细胞、子宫内膜细胞、血管内皮细胞等体外培养体系以及胎盘绒毛外植体模型、滋养层细胞自发合体化模型、细胞浸润和迁移模型、血管内皮细胞分化模型等，应用激光共聚焦、流式分选、慢病毒介导的敲降或过表达、RNAi、体细胞基因敲除等技术，研究基因/miRNA/蛋白质的功能及调控信号网络。 动物模型的技术途径：利用转基因、整体性基因敲除、条件性基因敲除小鼠模型（PR-Cre：子宫特异性敲除；CYP19-Cre和Tpbp-Cre：胎盘特异性敲除以及相关基因的loxp小鼠）、慢病毒介导的胎盘特异基因敲降/过表达模型、胚胎延迟着床模型、假孕模型、人工诱导蜕膜化模型、去卵巢模型、小鼠四倍体胎盘模型