几丁质酶基因对黄瓜遗传转化的研究-种植专业论文.docxVIP

摘 摘 要 黄瓜是人们喜食的蔬菜作物之一，在我国蔬菜周年供应上占有重要地位．但易受多 种真菌病害的危害而使产量降低，品质下降。传统的育种方法周期长、耗资大、效率低、 受抗性基因资源匮乏的限制、还易出现抗性退化的现象，用现有品种资源进行有性杂交 育种很难尽快得到具有抗性的优良品种。因此，本研究通过基因工程手段，利用农杆菌 介导法将菜豆儿】‘质酶基因导入黄瓜，建立了黄瓜高效的植株再生体系和遗传转化体系， 探讨了影响植株再生频率和遗传转化效率的主要因素，确立了最佳的植株再生和遗传转 化条件，获得了阳性转基因植株。主要研究结果如下： l外植体和6-BA浓度对器官发生的影响 子叶节是最佳的外植体；最适宜的芽 诱导培养基为MS+6．BA0．5rag／L。 2黄瓜遗传转化的最适宜条件 子叶节预培养l～2天，在含有6-BA0．5mg／L、乙 酰丁香酮(As)100mnol／L、pH5．2的MS培养基上进行培养．遗传转化效率最高。最佳 的选择压力为卡那霉素30mg／L。 3转基因植株的检测 用几丁质酶两端序列合成的引物对To代再生植株进行 PCR检测，结果“长春密刺”的78株再生植株中，有30株为阳性，占再生植株的38．7％。 PCR检测结果可初步证明目的基因已整合到黄瓜基因组中。 关键词： 黄瓜；几丁质酶；农杆菌介导的遗传转化 V il自!目目E_-|l目jIE__lEEE自目E_目目_自EgE