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一、目的 1、了解发酵罐的基本结构组成。 2、掌握发酵罐的操作规程及使用注意事项。 二、发酵罐原理及结构： 1、原理：发酵罐是进行液体发酵的特殊设备。生产上使用的发酵罐容积大，均用钢板或不锈钢板制成；实验室使用的小型发酵罐，容积从1L至数百升，罐体由耐压玻璃或不锈钢板制成，配备有无菌空气制备系统、蒸汽制备系统、控制器和各种电极，可以自动地调控实验所需的培养条件，是微生物学、生物工程、医药工业等科学研究所必须的设备。 2、?发酵罐的结构： 按照发酵罐的设备：分为机械搅拌通风发酵罐和非机械搅拌通风发酵罐。按照微生物的生长代谢需要,分为好气型发酵罐和厌气型发酵罐。 罐体：主要用来各种菌体的培养和发酵，密封性要好（防止菌体被污染）。 罐体当中有搅拌浆，用于发酵过程当中不停的搅拌；底部通气的Sparger，用来通入菌体生长所需要的空气或氧气。罐体的顶盘上有控制传感器，最常用的有pH电极和DO电极，用来监测发酵过程中发酵液pH和DO的变化控制器，用来显示和控制发酵条件等。 三 主要内容 1.各部件名称及功能 2.电极及电极标定 3.发酵罐的灭菌 4.发酵 5.注意事项 1.各部件名称及功能 发酵罐由罐体、管路、主机及附属设备四部分组成 2）管路 蒸汽 一路蒸汽进发酵罐夹套 二路蒸汽进发酵罐 三路蒸汽进取样管路 空气：进罐 水 一路进发酵罐夹套；电加热器、循环水泵、电磁阀 二路进排气管夹套 排气管 排水管 4）附属设备 蒸汽发生器 空气压缩机 2.电极及电极标定 pH电极、溶氧电极、泡沫电极、温度电极 pH电极、溶氧电极使用时需标定 1.pH电极和溶氧电极在标定之前要在缓冲液中浸泡并联机通电30min以上。 2.pH电极先标定零点（6.86），再标定斜率（4.00）。 3.在灭菌达到100℃时标定溶氧0%，（也可在饱和的亚硫酸钠溶液中标定0%）发酵参数设置完毕但还未接种时标定100%。 3 发酵罐的实罐灭菌 1）准备 开蒸汽发生器、开空气压缩机、开水源开关、标定电极、装罐。 2）预热（0-90℃） 开搅拌器，转速为200-300rpm；温度设为手动 微开排气阀、开排夹套水阀，三通阀提到上挡位，其它阀均关，缓慢开一路蒸汽阀，蒸汽进夹套预热 3）加热（蒸汽进罐）90-121℃ 停搅拌，开空气过滤器排冷凝水阀，开二路蒸汽阀，至基本无冷凝水排出，关小排冷凝水阀，三通阀放到下挡位，蒸汽进罐（调整过滤器前压力表示数在0.12-0.16MPa之间） 到100℃约2min后关闭排气阀 此时可标定溶氧为0% 4）保温阶段（121℃，20min） 开排气阀，旋松接种口， 开三路蒸汽阀—开取样阀—开罐底阀，6-7min后关闭，关闭顺序相反 调节进气量和排气量，使温度维持在121℃ 5）降温（121 ℃-发酵温度） 关接种口，三通阀提至上挡位，关二路蒸汽阀，关一路蒸汽阀，尾气关小 开空气过滤器排冷凝水阀，开空气阀，至无冷凝水排出时关闭排冷凝水阀，三通阀放至下档位。空气进罐 点注水开关，关闭排夹套水阀，开启进水阀和循环管线切断阀，调温度为自动。温度低于100℃时开搅拌 冷却过程中，罐压严禁掉零。 4.发酵 1）温度降至发酵温度后，设置各发酵参数，溶氧电极校100% 2）火焰圈接种（罐压调小后再接种） 3）. 接种后即可通气培养，罐压保持在0.05Mpa。 4）发酵初始化 5）发酵结束，数据存盘 6）放料，清洗，关仪器。 注意事项 4.1 在消毒过滤器时，流经空气过滤器的蒸汽压力不得超过0.17MPa，否则过滤器滤芯会被损坏，失去过滤能力。4.2 在发酵过程中，应确保罐压不超过0.17MPa。4.3 在实消过程中，夹套通蒸汽预热时，必须控制进汽压力在设备的工作压力范围内（不应超过0.2MPa），否则会引起发酵罐的损坏。 4.4 在空消、实消结束后冷却过程中，严禁发酵罐内产生负压，以免造成污染，甚至损坏设备。4.5 在发酵过程中，罐压应维持在0.03～0.05MPa之间，以免引起污染。 4.6 在各操作过程中，必须保持空气管道中的压力大于发酵罐的罐压，否则会引起发酵罐中的液体倒流进入过滤器中，堵塞过滤器滤芯或使过滤器失效。 实验二 乳酸细菌的培养与酸牛奶的制作 一、实验目的 1、掌握乳酸发酵的基本方法。 2、了解酸奶发酵的本质，掌握酸奶制作工艺。 二、实验原理 某类微生物在厌气条件下，利用 糖并在发酵液中积累乳酸的作用，称为乳酸发酵。它主要是乳酸细菌。常见的乳酸细菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。它们生成的乳酸，能抑制一些腐败细菌的活动。日常生活中利用乳酸发酵制泡菜、制造酸奶等。 以牛乳为原料， 通过乳酸菌（保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）的作用分解乳糖产酸，乳酸使牛奶中酪蛋白(约占全乳的2．9％，