优化实验设计方案提高学生的实验兴趣——以western blotting检测人血清IgG 实验为例.docVIP

优化实验设计提高学生的实验兴趣——以western blotting检测人血清IgG 实验为例-设计论文 优化实验设计提高学生的实验兴趣——以western blotting检测人血清IgG 实验为例 沈喜1，朱景红2，浦铜良1，易静1，向云1 ，张华1 ，冯虎元1 （1.兰州大学生命科学学院，甘肃兰州730000； 2.兰州大学第一医院，甘肃兰州730000） 摘要：近年高校的发展中，实践教学的加强和综合素质的培养已经成为当前大学教育改革的重点。分子生物学作为一门实践性较强的学科，广泛应用于生命科学的各个领域。通过对实验设计、实验材料、实验报告等各方面的优化改进，将基础实验与科研应用和专业发展前沿紧密结合。在提高学生学习兴趣的同时，培养学生的科研思维，促进学生发挥主观能动性，不断提高实践和创新能力，这也为学生后续的工作和科研打下了扎实的基础。 关键词 ：实验教学；分子生物学实验；优化设计；综合能力 中图分类号：G642.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2015）24-0251-02 基金项目：国家基础学科人才培养基金（J1210077，J1210033，J1103502）；兰州大学教学研究项目（201412） 作者简介：沈喜（1973-），女，浙江绍兴人，博士，实验师，研究方向：分子生物学实验教学及实验室仪器管理。 分子生物学是一门实验性很强的自然学科，从分子水平阐述生命活动的规律、揭示生命的本质，逐步广泛地应用于生命学科的各个领域。从实践意义上来说，其实验教学对提高学生的综合素质、培养创新精神与实践能力有着理论教学不可替代的特殊作用。这就对高校教师如何从基础教学入手，有效引导学生运用基础理论知识，不断提高发掘、探索和解决科学问题的能力提出了更高的要求。 下面，就以本实验教学中心分子生物学实验中一个经典的实验———“western blotting检测人血清IgG”为例来探讨如何优化实验设计，达到提高学生学习兴趣、培养科研思维的目的。 一、实验中待优化的问题 Western Blotting（蛋白质免疫印迹法）是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，经常用来定性地研究目的蛋白的分子量，或者定量检测目的基因蛋白水平的表达[1]。 在本实验的课程安排中，采用Western Blotting技术来定性地研究人类血清的主要抗体成分———IgG的相对分子质量。虽然经过几年的实践，该实验效果良好，但是发现实验设计中仍存在以下值得优化的问题：第一，通过实验只能获得目的蛋白IgG的相对分子量；由于实验内容未深入到定量实验，无法了解免疫球蛋白在人体不同免疫状态下表达量的差异，一则不符合科学研究的思路，二来没有打开提出问题的空间以提高学生分析实验结果的能力。第二，采用普通Marker电泳，当电泳结束后通过染色、脱色PAGE胶才能显出各标准蛋白条带，并且凝胶中的条带无法直接转移到NC膜上。所以，计算目的蛋白的分子量是根据A图按照标准分子量蛋白的各相对迁移率画出蛋白质的标准曲线（图1），根据B图免疫印迹结果求得目的蛋白分子量的相对迁移率，然后带入A图的标准曲线，最终求得目的蛋白的相对分子量。但是由于A图PAGE胶和B图NC膜的膨胀系数不同，学生计算过程中经常因蛋白迁移率的测量误差，导致求得的目的蛋白相对分子量存在系统误差。 二、优化措施 针对以上问题以及提高学生实验兴趣的目的，我们对该实验采取了以下优化手段。 （一）实验性质的优化 改变过去仅仅采用单一正常人血清作为样本，计算目的蛋白相对分子量的定性实验性质，而是进一步以正常人血清为对照，采用各种病例样本材料，定量分析不同病理状态下目的蛋白的表达含量的变化，将实验性质优化为定量实验（图2）。 ①标准蛋白样品；②正常人血清样品；③急性肺炎患者血清样品；④急性淋巴性白血病患者血清样品。 （二）实验材料的优化 换用预染Marker：预染Marker在电泳分离过程中，各标准蛋白的条带直接显色，可以让学生观察到条带逐渐分离的过程，形象而直观。另外，预染Marker的条带可以直接转移到NC膜上，当获得目的蛋白的免疫印迹条带后，可以在同一张NC膜上进行标准曲线的绘制和目的蛋白相对分子量的计算，减少了系统误差，使蛋白质分子量的计算更为准确。 （三）实验报告形式的改进 以论文的形式书写实验报告：本实验面向大二学生，他们习惯了实验报告的书写模式，要求他们学习按照论文的格式，查阅中文文献，了解“western-blottin