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治疗药物监测HPLC分析方法建立探讨 王峰 HPLC在治疗药物监测中的应用 监测药物种类繁多：茶碱、华法令、氯丙嗪、抗癫痫类药物、镇静催眠类药物、胺碘酮、免疫抑制药物等等。 可监测浓度范围：紫外可见光监测器，荧光检测器（高２－３各数量级），电化学检测器（10-12g），质谱检测器（10－１５g)，但具体与药物本身结构与检测条件有关 主要的缺陷：操作复杂、容易被干扰、 建立治疗药物监测方法的准备工作 了解所要监测药物的基本情况：监测范围、理化性质、监测意义 查阅文献 结合实际条件。 方法学问题探讨 １、为什么要考察标准曲线？ ２、为什么要考察紧密度？ 3、为什么要考察方法回收率？ ４、为什么要考察绝对回收率？ １、用已知的东西去了解未知东西。 ２、合理的东西是多大概率上的合理 　　　 为什么要考察标准曲线—定量分析依据 标准曲线是定量分析的根本依据 １、药物浓度（或质量）与药物在检测器上的产生的信号（通常采用峰面积A）成比例(正比) 即C１／C１＝A１／A２或M１／M２ ＝A１／A２ 图示： 标准曲线的几个问题 NCCLS EP6-P，定量分析方法线性的评价：推荐指南（1986）。 本文件包含评价仪器或定量分析方法是否满足制造商线性要求的方法; 以及为厂商提供了检测线性范围声明的指南。 本文件为设计评估临床化学仪器精密性能试验提供了指南；将结果估计的精密度与制造商的精密要求进行比较，以及确定比较是否有效。 １、相关系数是评价线性的客观标准，但应考虑到实际测定的需要，合理采用权重系数（１／x,1/x2,1/y,1/y2)（回收率） ２、标准曲线的范围确定取决于样品最低浓度与最高浓度。 ３、研究方法线性一般采用6-10点，并非点越多越好，合理是统计学上的合理。 ４、影响标准曲线的可能因素 仪器相应因素（仪器响应线性与方法线性的关系） 样品方法因素 色谱条件 ２、为什么要考察精密度－标准曲线的必要保证 精密度考察的几个问题 EP5-A，临床化学设备精密性能的评价：批准指南（1999）。 本文件为设计评估临床化学仪器精密性能试验提供了指南；将结果估计的精密度与制造商的精密要求进行比较，以及确定比较是否有效。 １、精密度表示平行测定结果的互相接近程度,一般用变异系数(coefficientofvariation,cv) 表示。亦即重复测定同一实际样品或模拟生物样品的相对标准偏差(ＲＳＤ)。 ２、ＣＶ可分为日内（withinday)CV和日间(daytoday)ＣＶ,批内(intraasay)ＣＶ和批间(interassay)。批内、批间ＣＶ更具有实际意义. 一般要求ＣＶ应小于15%,低浓度水平或复杂方法可放宽到小于20%。 精密度仅表示测定的重现性,但精密是保证准确的提前。 精密度考察设计：３－５点，２样品２平行 3、为什么要考察方法回收率？—标准曲线效能指标 方法回收率计算 R１＝C１／C1｀ R２＝C２／C２｀ C：通过标准曲线计算所得浓度 C｀：实际加入标准品浓度 R：回收率 EP10-A 定量临床检验方法的初步评价：批准指南（1998）。 本指南讨论分析方法或仪器性能初步评价的实验设计和数据分析（参见相产出版物GP10-A） 相对回收率几点问题 定义：回收率是用来衡量测定方法对生物样品中待测物的检测效能的,表示测定结果与真实值的接近程度,亦即测量值的正确性。 高、中、低浓度回收率可能不同。相对回收率能直接反映测定结果与真实值的接近程度,应控制在100%左右(95%～105%)。 绝对回收率—另一个概念 模拟生物样品经整个样品处理过程,而相应标准溶液直接分析,两者的响应值之比称为绝对回收率(ａｂｓｏｌｕｔｅｒｅｃｏｖｅｒｙ); 绝对回收率计算 R＝A１／A2 绝对回收率几个问题 绝对回收率与相对回收率关系 绝对回收率与相对精密度的关系 绝对回收率要求,所得响应值之比称为相对回收率relativerecovery)。绝对回收率一般应大于70%,过低说明方法中待测物质损失严重,过高(105%) 灵敏度（sensitivity） ,检测限(limitofdetection,LOD)ＬＯＤ是指分析方法定性检测生物样品中待测物的最低浓度。Ｓ/Ｎ)≥3 定量限(Limtofquantification,LOQ) ＬＯＱ是指分析方法能准确精密定量测定生物样品中待测物的最低浓度。Ｓ/Ｎ≥10 专属性考察 EP7-P，临床化学干扰试验，推荐指南（1986）。 本指南提供了描述干扰物质对试验结果影响的信息及程序。 质量控制(ｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌ,ＱＣ) 室内质控质量控制(Quality Control, QC) 为达到质量要求所采取的作业技术和活动。 质量控制包括作业技术和活动，其目的在于监视过程，并排除