细胞工程自选实验.docVIP

植物细胞工程 自 选 实 验 报 告 学院班级：农学院09级生物技术4班 学 号：20090101310100 姓 名：李晓芳 开题报告 研究进展：植物细胞工程是一门以植物组织培养为基础，具有广泛的应用前景和使用价值的生物技术。随着该技术的不断完善和发展，植物细胞工程已经在部分经济植物的育种和繁殖中发挥巨大作用。目前根据人们的需要已经相继完善和发展了一些具有特色的实用技术，包括植物细胞培养技术、单倍体育种和胚胎培养，制备转基因植物等。致谢技术的发展应用，使得植物细胞工程在人类的现代生活中的作用更加突出，并在经济植物繁殖，植物新品种选育和有用次生代谢物的产生方面有了重大突破。 实验内容：以新鲜的洋葱为实验材料，剥去外围的鳞茎组织，留下中间2~3cm茎尖，在升汞中消毒后再剥去外层最终留下约1~2cm的茎尖接种于灭菌培养基内繁殖生出愈伤组织，待20~30天后再将其接种于生根培养基内。灭菌时间根据不同材料而定。 材料：市售的新鲜洋葱 培养基：MS+NAA0.1mg/l+BA0.01mg/l+30g/l白糖+8.5g/l卡拉胶 洋葱愈伤组织培养 摘要：植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。通过洋葱茎尖分生组织培养(简称茎尖培养),使感染病毒病的植物重新获得无病毒植物。初步了解植物组织培养的基本原理和操作技术。 关键词：洋葱茎尖 组织培养 愈伤组织 洋葱又名球葱、圆葱、玉葱、葱头，荷兰葱，属百合科蒜属，为2年生草本植物。洋葱由于原产于大陆性气候区，其独特的口味已经被千千万万人接受。近年来对洋葱的组织培养技术成为一个热门的研究领域。洋葱组织培养可以由鳞茎培养获得，也可以由茎尖培养获得。而茎尖培养已成为最为广泛使用的方法. 为什么会使用茎尖呢? 茎的生长点培养，实际就是茎尖培养茎尖培养脱毒的原理是茎尖几乎不含病毒，采用旺盛分裂的茎尖组织培养，就有可能去除病毒。切取茎尖的大小与脱毒效果直接相关，茎尖越小，去病毒机会越大。通常茎尖取材大小，与脱病毒效果成反比，与茎尖成活率成正比。其次幼嫩组织分裂能力强，分化程度低，易脱分化诱导成愈伤组织。 洋葱组织培养实验的基础知识。 一 实验目的 1、了解和掌握基础组织培养的原理和基本操作技术。 2 、掌握植物脱毒的基本方法。 二、实验原理 植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。茎的生长点培养，实际就是茎尖培养茎尖培养脱毒的原理是茎尖几乎不含病毒，采用旺盛分裂的茎尖组织培养，就有可能去除病毒。切取茎尖的大小与脱毒效果直接相关，茎尖越小，去病毒机会越大。通常茎尖取材大小，与脱病毒效果成反比，与茎尖成活率成正比。其次幼嫩组织分裂能力强，分化程度低，易脱分化诱导成愈伤组织。 三 实验仪器及试剂材料 仪器：感量为0.0001g的电光分析天平 烧杯 玻璃棒 容量瓶 标签纸 灭菌锅 无菌操作台 培养瓶 镊子 解剖刀 酒精灯 试剂;大量元素;NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O MgSO 4·7H2O KH2PO4 Fe盐:FeSO4 ·7H2O Na2·EDTA·7 H2O 微量元素：KI H3BO3 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 维生素：烟酸 VB1 VB6 肌醇 甘氨酸 材料：市场上购得的洋葱数个 四 实验步骤 （一）培养基配置： 1按基本用量配MS培养基。洋葱茎尖组织培养的配方为MS+NAAmg/l+BA5mg/l +30g/l白糖+8.5g/l卡拉胶 2.加琼脂和无离子水至定容量的70%左右，加热使琼脂溶解； 3.琼脂溶解后，加入培养基母液、激素、糖等，稍加热使糖溶解； 4.糖溶解，加无离子水至定容量； 5.充分搅拌后，测pH值至要求值（PH=5.8）； 6.培养基分装入瓶。 （二）灭菌 1. 培养基灭菌（9瓶）; 2. 无菌水3瓶； 3. 牛皮纸一袋； （三）接种 1. 接种室紫外灯照射灭菌；无菌操纵台、接种器具（解剖刀、酒精灯、镊子）灭菌。 2. 接种。首先将洋葱除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净。把材料切