丝氨酸羟甲基转移酶的电泳制备.pptVIP

项 目 四 丝氨酸羟甲基转移酶的电泳制备 二、讨论确定方案 十二烷基硫酸钠是一种阴离子去污剂，与蛋白质结合可形成蛋白质-SDS复合物，由于十二烷基硫酸根带负电，使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原来的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别。 在聚丙烯酰胺凝胶电泳体系中加入SDS和巯基乙醇，能掩盖不同蛋白质间的电荷差异，并引起蛋白质构象变化，从而导致变性后的蛋白质分子在凝胶电泳中的迁移率取决于其相对分子质量大小，而与其他因素（原有电荷、形状）无关。通过这种电泳方式可将细胞中所有蛋白质根据各自的相对分子质量大小而分离开来。 材料：大肠杆菌培养物悬液（含SHMT） 器材：（1）夹心式垂直板电泳槽；（2）直流稳压电源（电泳仪）；（3）培养皿及竹夹子；（4）长针头（8~10cm）及普通针头；（5）注射器（10ml）；（6）微量进样器（50μl）；（7）细长皮头吸管；（8）移液管架；（9）棕色试剂瓶；（10）白色试剂瓶；（11）1ml 、2ml、5ml吸量管；（12）卷纸1包；（13）大平皿，（14）移液枪（配20μl枪头）。 （二）试剂及配制 （3）10%SDS溶液 称取SDS 10.0g，加蒸馏水，68℃助溶，定容至100mL。 （4）10%过硫酸铵溶液 称取1.0g过硫酸铵，加水定容至10mL，4℃保存。 （5）0.1%溴酚蓝溶液