2013-06细胞工程概论st课件.pptVIP

细 胞 工 程 Cell Engineering;一、细胞工程在现代生物技术中的地位;基因工程 蛋白质工程 酶工程 发酵工程 染色体工程 细胞工程;基因工程; 基因工程基本过程;蛋白质工程;功能检测; 通过预先设计，经过人工操作控制而获得大量所需的酶，并采用各种方法使酶发挥最大催化功能，而应用于社会的一门技术。;酶工程的基本过程; 利用现存微生物和经 DNA 重组技术改造的微生物在全自动发酵罐或生物反应器中生产某种商品的技术。; 发酵工程的基本过程;染色体工程;细胞工程; 按照人们的设想，置换细胞质或细胞器。;二、细胞工程的理论基础;三、细胞工程的研究范围 ;第二节 细胞工程的主要技术 ; 根据培养物的不同分为细胞培养、组织培养和器官培养。; 将活体中取出的组织或细胞，制成单个 细胞悬液，并培养于固体基质或培养液中，使之生长和生存，并维持其结构和功能的技术。; 将一小片活体组织放在盛有培养液的培养器皿中，使之贴壁生长过程。; 使器官原基、一部分或整个器官在体外存活、生长，并保持其原有结构和功能的技术。;（二）细胞培养概述; ★排列成放射状，漩涡状并不紧靠连成片 ★细胞—细胞接触易断开而单独行动 ★游离的成纤维样细胞，常有细胞突起; 脾、骨髓及白细胞 在悬浮中生长良好，细胞圆形，单个或小细胞团 生存空间大，数量多，传代方便，易收获，可获稳定状态;3.培养细胞形态不稳定性;;原代培养期:也称初代培养，即从体内取出组织接种培养 到第一次传代阶段，一般持续1-4周。 特点: 细胞呈活跃移动，可见细胞分裂，但不旺盛。 与体内原组织在形态结构和功能上相似性大。 传代期:当细胞增殖达到一定密度后，由于生存空间和营 养有限，必需分离出一部分细胞和更新营养液， 以保持细胞的继续生存，这一过程叫传代。 特点: 在全生命期中此期的持续时间最长，细胞增殖旺 盛，并能维持二倍体核型。 衰退期 特点: 此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，最后 衰退凋亡。 ;（2）体外培养细胞生存期;6.培养细胞生存所需基本物质;（三）大规模细胞培养原则;3.抑制细胞凋亡;4.无血清培养基;（四）大规模细胞培养方法;优点： ◆设备简单，成本低。 ◆容积可选择性大。 ◆可连续收集培养细胞和产物进行分析、传代。 ◆无须消化，防止细胞损伤。 ◆细胞浓度均一，产量恒定。 缺点： ◆震荡(避免沉降)。 ◆不断充气(细胞代谢和气体交换)。 ◆易产生气泡(添加抗泡沫剂)。;2.固定化培养;优点： ◆细胞可维持在较小体积培养液中生长。 ◆细胞生长密度较高。 ◆培养液易于更换。易进行实时分析。;3.气流驱动培养系统;4.微载体培养系统;5.灌注培养系统;;1)人工模拟条件与体内实际情况不完全相同。 2)长期生活在缺乏动态平衡的体外培养环境中,细胞特性将发生变化。;生物技术上：生产各种生技术产品。 狂犬病、小儿麻痹症等病毒疫苗、表皮生长因子、 干扰素、白细胞介素等 进行单克隆抗体制备。 科学研究上：病毒学、免疫学、遗传学、肿瘤学等。 临床医学上：胎儿的遗传性疾病分析，药物筛选及某 些疾病的治疗等。;二、细胞融合;（二）细胞融合的基本原理;异核细胞：非同源细胞的融合体。 同核细胞：两个相同细胞的融合体。 多核细胞：含有双亲不同比例核物质的融合体。;3.融合因素;4.细胞融合过程;(三)细胞融合方法;优点:打破了细胞融合的种属屏障。 缺点: 病毒制备困难、操作复杂、灭活病 毒的效价差异。;步骤：;2.物理法;电脉冲诱导;3.化学法;聚乙二醇（PEG）法;◆分子量大于 200 小于 6000 者均可用作细胞融合剂, 一般分子量低于1000的PEG作融合剂最好。 50％ PEG溶液能产生最多杂交细胞。 PEG 溶液在 pH=6.0 时细胞融合率最高。;优点: ◆易得，用法简单，勿需特殊设备，融合成本低； ◆融合易控制,效果稳定,产生的异核率较高； ◆融合过程不受物种限制。 缺点: ◆融合过程繁琐，可能对细胞有毒害。?;★研究细胞的核质关系;人源单克隆抗体;问题: 1.细胞株的遗传性不稳定 2.存在伦理方面的问题; 利用显微操作技术将一个