袁海明-染色体微阵列的原理与临床应用素材课件.pptVIP

目前流产物检测常用手段为核型分析与荧光原位杂交 (fluorescent in situ hybridization, FISH)。 核型分析：5Mb以上遗传物质改变，无法对许多具有致病性的染色体亚显微结构的变异--染色体微缺失/微重复做出检测。此外需对绒毛组织进行细胞培养，耗时较长，且容易污染。一些活性差的细胞生长受到抑制，或者母体细胞过度生长，这都会导致得不到准确核型。而临床上部分流产物已不具有细胞活性，导致培养失败。 FISH检测：可避免细胞培养，然而仅能对特异染色体数目异常进行筛查，常用探针为13、16、18、21、22、X、Y探针，无法对与特异探针结合的其它染色体数目异常进行检测，因此存在假阴性的可能。 CMA：可在全基因组范围内同时检测染色体数目异常和染色体微缺失、微重复等结构异常、嵌合体和ROHs等，无需细胞培养，实验周期短，结果更加准确可靠 非整倍体中16三体所占比例最高(20.5%)，且均在孕早期流产。 其次为Turner综合征( 14.5%)，流产可发生孕期各阶段。 绝大多数染色体非整倍体为新生突变，而D组(13,14,15)和G组 (21,22)有发生罗伯逊易位的可能，建议夫妻双方做核型分析， 排除罗伯逊易位的可能性。 孕妇年龄为发生染色体数目异常高危因素，而本文小于35岁发生 染色体数目异常导致流产占24.6% 由于染色体结构异常导致流产81.25%为反复习惯性流产，提示 夫妻双方是平衡易位(75%)，建议再次生育做PGD。 染色体内部微缺失/微重复例如DiGeorge、Williams、 Beckwith-Wiedemann等综合征流产发生在孕晚期，核型分析 无法检测。 UPD 小 结 CMA能够提供快速、准确的流产物全基因组分析，能够检测染色体数目异常、结构异常、嵌合体和ROHs等，且无需标本培养，能提供比传统的细胞遗传学检测更多的遗传信息，可为流产病因分析和对夫妻双方再次生育指导提供更有价值的信息。 指导下一次妊娠 减轻患者不必要的心理负担。 检测标本 活检的单个卵裂球 绒毛 引产胎儿组织 羊水 脐血 外周血 是目前较为成熟的遗传性疾病诊断技术 传统核型分析技术 绒毛活检取材 孕中期羊膜腔穿刺羊水 细胞培养 染色体核型分析 染色体数量变化、平衡、不平衡易位、转位和显微镜下 可见的大片段缺失和重复。 核型分析局限性 材料受限，需要新鲜的组织、血样进行活细胞培养 不能分辨长度在10Mb以下染色体片断的缺失、重复或易位 染色体亚端粒区域异常诊断率较低 不能检测LOH和UPD 单细胞分析 高分辨率分析 荧光原位杂交技术（fluorescent in-situ hybridization，FISH) 可对相应位点的缺失、重复、易位及多倍体等染色体异常作出诊断 提高了染色体异常的诊断精度 FISH探针能同时与分裂期染色体或间期核染色丝特异杂交----无需细胞培养，可用于单细胞分析 Chromosome 13q13-14 荧光标记的DNA探针 中期分裂相 间期细胞核 Chromosome 21q21 FISH局限性 只能检测已知突变的疾病，对背景未知的基因引发的疾病无法检测。 不能分辨LOH和UPD 一次最多只能检测5-8个位点，无法进行整个基因组的检测，增加探针又会面临准确性下降的问题。 对植入前胚胎的检测，缺乏覆盖全基因组检测的能力 染色体微阵列技术（chromosomal microarray analysis） 微阵列比较基因组杂交(array comparative genomic hybridization, aCGH) SNP array 微阵列比较基因组杂交技术(array comparative genomic hybridization, aCGH) aCGH技术图示：正常对照样品和患者样品基因组DNA用两种不同的荧光染料进行标记（正常样品用Cy3标记呈现绿色，患者样品用Cy5标记呈现红色）。绿色峰（Cy3）表明红色信号缺失，与对照样品相比患者DNA样品发生缺失。相反如果Cy5信号增强显示为红色峰（红色箭头），表明患者DNA样品特定基因组区域发生获得。aCGH芯片能够定位DNA拷贝数量变化在基因组的位置。 SNP芯片含有大量寡核苷酸探针，起初设计被用于检测SNP等位基因。 SNP芯片不仅能够研究拷贝数变异（CNV），而且还能够对SNP基因型进行分析 SNP array 染色体微阵列(chromosomal microarray analysis,CMA)技术优势 全基因组范围内同时检测染色体数目异常和结构异常如染色体微缺失(deletion)和微重复(duplica