高二生物《专题植物的组织培养技术》.pptVIP

湖南长郡卫星远程学校 2012年上学期 制作 03 主讲：胡昆 离体的植物器官、组织、细胞 脱分化 愈伤组织 再分化 根 芽 植物体 （一）植物组织培养的过程 愈伤组织 污染的预防措施 （一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁 （二）影响植物组织培养的因素 植物组织培养条件 　　含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。 　　　　　　　　　 高 利于根的形成 生长素/细胞分裂素　 适中 促进愈伤组织的生长 低 利于芽的形成 分化频率提高 同时使用 细胞既分裂也分化 先使用细胞分裂素，后使用生长素 有利于细胞分裂，但细胞不分化 先使用生长素，后使用细胞分裂素 实验结果 使用顺序 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉 花粉是由花粉母细胞（小孢子母细胞）经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。 花粉的发育要经历：四分体时期、单核期、双核期等阶段。 （一）被子植物的花粉发育 雄蕊 基础知识 （一）被子植物的花粉发育 被子植物花粉的发育过程 （二）产生花粉植株的两种途径 ① ② 移栽 花药中的花粉 胚状体 脱分化 愈伤组织 花药中的花粉 脱分化 分化 丛芽 再分化 丛芽 诱导 生根 （二）产生花粉植株的两种途径 体细胞胚（胚状体）： 在组织培养过程中，某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为体细胞胚（胚状体）。 （三）影响花药培养的因素 材料的选择 培养基的组成 KT （三）影响花药培养的因素 ——材料的选择 花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的初花期。 选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。 为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。 （三）影响花药培养的因素 ——材料的选择 花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的初花期。 选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。 为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。 为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 （三）影响花药培养的因素 （一）材料的选择 　　选择花药时，一般要通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 　　最常用的方法有醋酸洋红法。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 实验操作 （二）材料的消毒 1. 将花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30s 2. 无菌水清洗 3. 无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4. 放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中 2~4min（也可质量分数为1%的次氯酸钙 溶液或饱和漂白粉溶液） 5. 无菌水冲洗3~5次 （三 ）接种和培养 灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。