PARP-1在纳米二氧化硅致人皮肤角质细胞凋亡过程中的作用.DOCVIP

PARP-1在纳米二氧化硅致人皮肤角质细胞凋亡过程中的作用 龚春梅ab 陶功华ab 刘建军b 庄志雄b# a 中山大学公共卫生学院 广东 广州 510080 b深圳市疾病预防控制中心毒理科 广东 深圳 518020 # correspond to zxzhuang2007@126.com 目的 探讨PARP-1基因对纳米二氧化硅（15nm）溶液及标准二氧化硅溶液(1-5μm)致人皮肤角质细胞（HaCaT）凋亡过程的影响。 方法 应用RNAi技术通过慢病毒PLKO.1-GFP建立PARP-1的缺陷细胞株；通过PCR扩增人类PARP-1的全长cDNA，利用基因转染技术，将人的PARP-1基因cDNA克隆于逆转录病毒载体pBABE-neo质粒，通过293T细胞包装成病毒后感染HaCaT细胞，应用G418筛选建立PAPR-1的稳定高表达细胞株；纳米二氧化硅溶液通过间接表征（粒径分布、表面ZETA电位、纯度测定）及直接表征（透射电镜）后，制备成不同浓度的培养液与HaCaT细胞直接接触培养24h，Hoechst33342染色法通过荧光显微镜检测细胞凋亡图像，应用Annexin V/PI双染法，通过流式细胞仪检测早期细胞凋亡率。 结果 将A1、A2、A3、A4、A5 五个含有PARP-1干扰序列的发夹和辅助质粒VSVG、delta8.9，通过293T细胞包装成慢病毒后，感染H