BCR TCR的编码基因工程.pptVIP

（三）基因节段间连接的12?23bp规律 核苷酸序列分析发现，在BCR基因的VDJ基因节段的侧面都有重排信号序列。 在基因节段侧面存在的这种特殊的、相互关联的侧翼序列（flanking sequence）或称共有序列，能触发VDJ节段的重排并决定节段间的连接，又称重组信号片段（recombination signal segment, RSS）。 每个侧翼序列含有一个7核苷酸的回文序列（palindromic sequence）和一个9核苷酸的保守序列，两者之间有一段固定数目（12?1和23?1）的随机核苷酸序列分隔。 RSS的重要特点是，分隔7核苷酸和9核苷酸的随机核苷酸序列数目是固定的12 bp或23 bp。这个数目代表DNA双螺旋的一个或两个完整螺旋，说明围绕每个待连接基因节段的侧翼序列在空间上和方位上也是精确互补的，很可能因此决定或控制了重排的发生。 RSS位于V基因的下游，J基因的上游，D基因的两侧。 一个侧面有12 bp分隔序列的基因节段只能与一个侧面有23 bp 分隔序列的基因节段重组或连接，反之亦然。这一现象称为12??23 bp 规律。 二、TCR基因重排 TCR基因重排在胸腺中完成。T细胞中TCR基因的重排顺序与B细胞中Ig基因重排顺序相似。在前T细胞中，TCR的?链或?链VDJ基因节段的D和J首先连接在一起，然后在胸腺细胞中再与V连接，形成VDJ基因。VDJ基因或VJ基因（? 链和 ? 链）重排完成后，再与C基因节段连接成为功能性基因。TCR基因重排的次序在胸腺中受到严格的控制。 （一）基因重排的顺序 在V区基因重排时，先选择一个DH节段与一个JH节段连接在一起，然后选择一个VH节段与DH-JH相连。一旦VH-DH-JH重排成功并且得到功能性表达，其产物就会抑制另一条染色体上等位基因的重排，此现象称为等位基因排除。同时，基因产物触发VL基因重排。 一条染色体上重排的VH或VL基因不能获得功能性表达，即重排不成功，称为无产物重排，细胞就会启动另一条染色体上等位基因重排。如果两条染色体上VH基因都是无产物重排，细胞即死亡。 首先是Dδ-Jδ重排，剪切去除两基因节段间的DNA片段，使Dδ-Jδ连接，第二步是Dδ-Jδ与Vδ间的重排，使Vδ-Dδ-Jδ连接，重排后的DNA构成编码Vδ区基因，以其为模板，产生初级转录RNA,进而与编码C区基因的转录RNA拼接（splicing），构成mRNA。 TCR? 基因重排与IgL基因重排相似，重排使V?-J? 连接，进而产生初级转录RNA，再与C区基因转录拼接形成TCR? mRNA。 TCR? 基因重排与TCR? 因重排相似。 TCR? 基因重排与TCR? 基因重排相似。 TCR?? 及 ?? 基因重排均在胸腺内不成熟细胞阶段，但成熟T细胞只表达一种TCR，即TCR??（占90%以上），或TCR??，同一T细胞表面不会表达两类TCR，其原因与沉默子（silencer）相关，当TCR? 基因重排后，? Silencer灭活，则TCR? 基因重排，产生?? 型TCR；若 ? Silencer仍活化，则抑制TCR? 重排，发生TCR? 基因重排，产生 ?? 型TCR。 一个克隆的T细胞只表达一种抗原特异性TCR??，乃是由等位基因排斥所致，TCR?重排后，抑制其它TCR? 基因节段发生重排，从而保证克隆化T细胞对特异抗原应答的专一性。 （二）TCR?基因重排启动TCR?基因重排 TCR?基因重排发生在胸腺内的CD44-CD25+CD3-CD4-CD8-的早期T细胞阶段，当细胞发育至CD44-CD25-CD3+CD4-CD8-阶段，发生TCR?基因重排，当细胞发育至CD4+CD8+阶段时，则表达TCR??链。 故TCR? 基因重排发生在TCR?基因重排之后。若将TCR? 基因灭活，则无TCR? 基因重排。将p56lck基因灭活，亦无TCR? 基因重排，推测是TCR?链与配基结合后，信号经CD3分子传导活化， p56lck逐步活化TCR? 基因重排。 （三）TCR基因重排的控制 在小鼠T细胞发育过程中，? 链基因和? 链基因首先重排。小鼠胚胎第14天，这两种基因就有较高的转录；第15天时，即可在小鼠T细胞表面检出。在胚胎发生时? 链基因和 ? 链基因的重排稍迟：? 链基因较早重排，胚胎第14天可检出D?-J?重排，第15天可见完整的V-D-J?基因，而到第16天才能检出?链基因的重排。 第三节 BCR/TCR多样性产生的机制 一、BCR （一）组合连接造成多样性 在胚系中，VH、VL、DH、JH、JL基因节段众多的数目，使B细胞可以从中各选择一个基因节段组合并连接成各种不同的功能性基因。其编码的可变区可以识别107种抗原特异性。 （二）VDJ连接的多样性 在DH-JH、VH